$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تشريح أمعاء الزرد اليرقات لاستعادة المطثية العسيرة القابلة للحياة
- عزل الجهاز الهضمي عن اليرقات لتحليل الحمل البكتيري. ابدأ بالقتل الرحيم يرقات الزرد بنسبة 0.4٪ تريسين.
- اشطف سمك الزرد لفترة وجيزة باستخدام 1x PBS معقم (محلول ملحي فوسفات) وانقلها إلى طبق الاغاروز الطازج.
- تشريح الزرد
- أدخل إبرة في الجذع الظهري ليرقات الزرد بالقرب من الرأس لشل حركة الزرد. قم بإزالة الرأس خلف الخياشيم باستخدام إبرة وخز.
- أدخل الإبرة الثانية في منتصف الجذع الظهري. أدخل الإبرة الثالثة في بطن الزرد واسحب الأمعاء من تجويف الجسم.
ملاحظه: هناك حاجة إلى العناية القصوى لعزل الأمعاء السليمة. إذا كان من الصعب القيام بذلك ، فقم بإجراء عمليات سحب إضافية لفصل باقي الأمعاء عن الأعضاء الداخلية المتبقية. - استخدم إبرة حقن مجهرية لنقل 10-15 أمعاء إلى أنبوب 1.5 مل يحتوي على 200 ميكرولتر معقم 1x PBS.
- قم بتجانس الأمعاء بمدقة لتعطيل الأنسجة وتحضير المتجانسات. تأكد من وصول المدقة إلى قاع الأنبوب لتعطيل جميع الأمعاء تماما.
- احتضان المتجانسات في وسط تربية المطثية العسيرة المحتوي على D-cycloserine و cefoxitin ، مع أو بدون taurocholate (TCA ، نبتة جراثيم المطثية العسيرة ) في غرفة لاهوائية.
- احتضان اللوحة بشكل لاهوائي لمدة 48 ساعة عند 37 درجة مئوية.