نمو البكتيريا على شريحة الموائع الدقيقة لدراسة مقاومة أدوية المضادات الحيوية

الملخص

المصدر: ليو ، بي سي ، وآخرون. تصميم واستخدام الممرض الآلي منخفض التكلفة للتطور التكيفي للبكتيريا تحت اختيار دواء المضادات الحيوية. J. Vis. خبرة. (2016)

يوضح هذا الفيديو استخدام شريحة الموائع الدقيقة لتصور ومقارنة نمو ومورفولوجيا سلالات الإشريكية القولونية من النوع البري والمقاومة لتريميثوبريم تحت إجهاد المضادات الحيوية تريميثوبريم.

البروتوكول

1. على تجربة نمو الرقاقة

1. قبل التحميل في جهاز الموائع الدقيقة ، اغسله بالماء منزوع الأيونات لمدة ساعة واحدة ومتوسط M9 لمدة ساعة واحدة.
2. قم بإذابة العينة المجمدة اليومية في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق وقم بتلقيح أنبوب اختبار جديد بوسط M9 جديد. ضع العينة في حاضنة شاكر عند 37 درجة مئوية طوال الليل.
3. قم بتخفيف العينة الميكروبية 10 أضعاف باستخدام وسيط M9 وقم بتحميلها في جهاز الموائع الدقيقة عن طريق الضغط على حاوية العينة الميكروبية عند 5 رطل لكل بوصة مربعة. ثم قم بتحميل وسط الدواء ثلاثي ميثوبريم (TMP) في الرقاقة عن طريق الضغط على حاوية الدواء المتوسطة عند 5 رطل لكل بوصة مربعة. قم بتنفيذ الخلط بين الميكروب والدواء عن طريق تشغيل الصمام الميكانيكي الميكروميكانيكي بين الغرفتين على رقاقة الموائع الدقيقة لمدة 15 دقيقة.
4. ضع رقاقة الموائع الدقيقة في حاضنة المجهر المثبتة على المجهر المقلوب. احصل على صورة الخلية في غرفة النمو كل ساعة لمدة 8 ساعات باستخدام كاميرا CCD المثبتة على المجهر المقلوب.
5. استخدم البرنامج النصي المخصص لحساب أرقام الخلايا من خلال خوارزمية عتبة على بيانات صورة الخلية. لاحظ أن متوسط بيانات عدد الخلايا يتم حسابه عادة على ثلاث غرف موائع دقيقة.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
المجهر المقلوب	أنظمة لايكا الدقيقة	لايكا DMI-LED	تستخدم لقياس الموائع الدقيقة استخدم X40 NA الموضوعي = 0.55
حاضنة المجهر	أداة الخلية الحية	نحو 109	تستخدم لقياس الموائع الدقيقة
صمامات الملف اللولبي	بنيومادين	S10MM-31-12-3	يفتح عادة 1.3 وات 12 فولت تيار مستمر
بطاقة واجهة USB	هندسة هوايات	وحدة الإدخال / الإخراج الرقمية USBIO24-R	لقياس الموائع الدقيقة
ضاغط الهواء	الروك العلمي	الروك 440	مصدر ضغط للموائع الدقيقة الحد الأقصى.الضغط 80 رطل لكل بوصة مربعة
تركيبات قفل لور للذكور إلى 1/8 "شوكة	ValuePlastics.com	MTLL230-1	تستخدم للتحكم في الموائع الدقيقة
1/8 "شوكة إلى 10-32 منفذ مترابطة	ValuePlastics.com	ب-1	تستخدم للتحكم في الموائع الدقيقة
تركيبات قفل لور الأنثوية إلى 10-32 منفذا مترابطا	ValuePlastics.com	KFTL-1	تستخدم للتحكم في الموائع الدقيقة
ترانزستور NPN دارلينجتون 500 مللي أمبير ، 40 فولت (2N6427)	DigiKey.com	2N6427GOS-ND	تستخدم للتحكم في الموائع الدقيقة
10 كيلو أوم ، مقاوم فيلم الكربون ، 0.25 واط	DigiKey.com	P10KBACT-ND	تستخدم للتحكم في الموائع الدقيقة
مكثف التنتالوم ، 10 فائق التوهج ، 25 فولت ، 10٪	DigiKey.com	478-1841-ND	تستخدم للتحكم في الموائع الدقيقة
كاميرا Andor CCD	أندور	Zyla 4.2 Plus SCMOS	تستخدم لتصوير الموائع الدقيقة على الرقاقة
تريميثوبريم	سيغما
ديفكو M9 الحد الأدنى من الملح 5x	دينار بحريني		متوسط