ترسيب الكالسيت المستحث ميكروبيولوجيا بواسطة Sporosarcina pasteurii

الملخص

المصدر: Bhaduri، S.، et al.، ترسيب الكالسيت المستحث ميكروبيولوجيا بوساطة Sporosarcina pasteurii. J. Vis. Exp. (2016)

يوضح هذا الفيديو طريقة إثراء Sporosarcina pasteurii باليوريا وكلوريد الكالسيوم لتحفيز نشاط اليورياز ، مما يؤدي إلى تكوين بلورات الكالسيت المرئية من خلال ترسيب الكالسيت الناجم عن الميكروبيولوجيا ، أو MICP.

البروتوكول

1. بروتوكول تخصيب المغذيات لتسريع هطول الأمطار

1. انقل 9 مل من سائل المزرعة المحضر (الخلايا + الوسط) إلى عدة أنابيب طرد مركزي معقمة ، كل منها بحجم 10 مل.
2. قم بإعداد محلول مخزون 100 مل من التخصيب الخارجي يتكون من أربعة مكونات بتركيزات التالية في وسط طازج: اليوريا: 2 جم / لتر ، كلوريد الأمونيوم: 1 جم / لتر ، بيكربونات الصوديوم: 212 مجم / لتر ، كلوريد الكالسيوم: 280 مجم / لتر. قم بقياس جميع المكونات بعناية باستخدام توازن تحليلي واخلط كل ما عدا اليوريا مع وسط طازج في دورق وضعه في الأوتوكلاف (121 درجة مئوية ، 15 رطل لكل بوصة مربعة ، 15 دقيقة).
   1. بعد الأوتوكلاف ، اخلطي الكمية المطلوبة من اليوريا (2 مجم) مع 1 مل من الوسط الطازج ومرريها عبر حقنة مزودة بفلتر حقنة 0.22 ميكرومتر لإكمال عملية التخصيب.
   2. أضف 1 مل من وسط التخصيب هذا مع إضافات إلى أنابيب الطرد المركزي المعقمة التي تحتوي على 9 مل من سائل المزرعة المحضر (خلايا + وسط).
      ملاحظه: لا يمكن تعقيم اليوريا ، كونها قابلة للتحلل في درجات حرارة مرتفعة ، في الأوتوكلاف. ومن ثم ، بعد تعقيم المكونات الأخرى (121 درجة مئوية ، 15 رطل لكل بوصة مربعة ، 15 دقيقة) ، تضاف اليوريا أخيرا من خلال مرشح حقنة 0.22 ميكرومتر.
3. دوامة كل أنبوب جيدا باستخدام دوامة ميكانيكية. ضع السوائل المخصبة (الخلايا + الوسط + المواد المضافة) في حاضنة غير قابلة للاهتزاز عند 30 درجة مئوية. راقب جميع الوحدات بانتظام لبدء هطول الأمطار. باستخدام المجهر الضوئي ، ابدأ الملاحظات المجهرية بمجرد اكتشاف بداية هطول الأمطار بالعين المجردة. عادة ما يكون هذا ما بين 30 - 36 ساعة بعد بدء التجارب.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
قوارير بيركس	فيشر العلمية	س 63268	كورنينج إرلينماير
اسطوانة القياس	كول بارمر	CP08559GC	كول بارمر الفئة أ اسطوانة متدرجة ث / كال شهادة ، TC ؛ 1000 مل ، 1 / بكسل
الميزان التحليلي	أوهاوس	AX124E	تستخدم لقياس وزن الكواشف
الأوتوكلاف	برينكمان	58619000
شريط الأوتوكلاف	VWR	52428864
رقائق الألومنيوم	سيجما ألدريتش	Z185140	يتم استخدامه لإغلاق القارورة قبل وضعها في الأوتوكلاف
مخزون بكتيري	سيدارلين	11859	-80 درجة مئوية مخزون من S. pasteurii ، رقم ATCC. مذكور ضد القط. لا.
ماصات ميكانيكية أحادية القناة Mline، حجم متغير	بيوهيت	725010	يتم تسويقها بواسطة VWR تحت رقم الكتالوج 14005976
طرف الماصة الدقيقة	فيشر العلمية	هاتف: 212772 ب	تستخدم لخدش ألواح أجار
حاضنه	الموثق	80079098	حاضنة علم الأحياء الدقيقة ، سلسلة BF
حاضنة اهتزاز	VWR	14004300	حاضنات اهتزاز VWR Signature Benchtop
بارافيلم	سيجما ألدريتش	ص 7793	تستخدم لإغلاق ألواح أجار
يوريا	سيجما ألدريتش	تحت 1250	إثراء لوسط المغذيات
بيكربونات الصوديوم	سيجما ألدريتش	ط8875	إثراء لوسط المغذيات
كلوريد الكالسيوم	سيجما ألدريتش	ج1016	إثراء لوسط المغذيات