$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. تحضير الأدوات ووسائط الثقافة والحلول وأطباق بتري
1. أعواد الأسنان الأوتوكلاف في دورق سعة 50 مل مغطى بورق الألمنيوم لإبقائها معقمة.
2. تعقيم جميع السلع الجافة التي سيتم استخدامها (النصائح ، العصي ، الأواني الزجاجية ، إلخ) في الأوتوكلاف.
ملاحظه: أنذر! اتبع جميع إرشادات السلامة لطراز الأوتوكلاف المستخدم. تشكل الأوتوكلاف خطر الانفجارات والحروق الناتجة عن البخار والتلامس مع الأسطح الساخنة والمواد والوسائط.
3. قم بإعداد أجار MS (دقيق الصويا مانيتول (SFM)) لزراعة الثقافات.
1. أضف 5 جم من دقيق الصويا و 5 جم من الأجار إلى قارورة سعة 1 لتر.
2. قم بإذابة 5 جم من المانيتول في 250 مل من ماء الصنبور ووزعها في القارورة التي تحتوي على دقيق الصويا والأجار.
3. أضف سدادة رغوية ورقائق معدنية إلى فتحة القارورة والأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية ، 15 رطل لكل بوصة مربعة لمدة 30 دقيقة على الأقل.
أنذر: هذا الوسط يغلي بسهولة. استخدم قارورة يمكنها استيعاب أربعة أضعاف الحجم الفعلي لجهاز أجار التصلب العصبي المتعدد الذي يتم تعقيمه. يمكن استخدام قدر الضغط القياسي بدلا من الأوتوكلاف مع اعتبارات السلامة المماثلة. بدلا من ذلك ، يمكن استخدام فرن الميكروويف لتعقيم الوسائط والمواد إذا لم يكن الوصول إلى الأوتوكلاف ممكنا. قد يرغب معلمو المدارس الثانوية أيضا في التعاون مع الكليات أو الجامعات المحلية للوصول إلى الإمدادات المعمقة.
4. تبريد الوسائط حتى تصبح مريحة بما يكفي للتعامل معها. احرص على عدم تبريده لفترة طويلة لأن أجار يتجمد عند درجات حرارة أقل من 50 درجة مئوية.
5. صب أجار MS من القارورة في أطباق بتري معقمة حتى يصبح قاع كل طبق بتري نصف ممتلئ تقريبا (حوالي 25 مل من الوسائط لكل طبق بتري). اتركيه يتجمد قبل استخدام ألواح أجار. قم بتخزين ألواح أجار في كيس بلاستيكي في درجة حرارة الغرفة لحين الحاجة.
ملاحظه: يمكن أيضا تخزين ألواح أجار في الثلاجة ، خاصة إذا كانت هناك حاجة إلى المضادات الحيوية في الوسائط.
2. Streak Streptomyces على ألواح للتكاثر
1. سلالات Streak Streptomyces على ألواح أجار MS إلى مستعمرات مفردة باستخدام طريقة قياسية ، مثل طريقة الخط الرباعي.
ملاحظه: يمكن استخدام حلقة تلقيح أو أعواد أسنان معقمة. اختياري: تستخدم الوسائط الأخرى بشكل شائع لأنواع Streptomyces ، مثل R2YE والحد الأدنى من الوسائط.
2. احتضان الألواح عند 30 درجة مئوية.
3. قم بإعادة ضبط الألواح عن طريق اختيار مستعمرة واحدة كل 4-6 أيام. مع تقدم المستعمرات في العمر ، تصبح عرضة للطفرات العشوائية.
3. مقارنة وتسجيل المظهر المرئي
1. لاحظ مورفولوجيا المستعمرة لكل متحولة مقارنة بالسلالة الأم من النوع البري بعد خطوط جميع السلالات كما في الخطوة 2. قارن العزلة الجديدة بتلك الموجودة في الأنواع المدروسة جيدا ، مثل S. coelicolor أو S. venezuelae ، عند توصيف أنواع Streptomyces الجديدة. لاحظ الخصائص (الشكل 1) مثل الشكل الأساسي ، وسطح المستعمرة (غامض ، أصلع ، مجعد ، إلخ) ، عتامة ، ارتفاع ، وتصبغ (يميز بين الفطريات الخضرية ، والفطريات الهوائية ، و / أو الوسط المحيط).
2. قم بتسمية لوحة أجار MS وسلالات من النوع البري والطافرة في أنماط إسفين (الشكل 1). احرص على عدم لمس أي سلالة سلالة أخرى لتجنب انتقال التلوث. لاحظ تاريخ ووقت خطوط السلالات على اللوحة. احتضان الأطباق عند 30 درجة مئوية.
3. ضع أطباق بتري المزروعة على ورق ملون أو أبيض لتجانس الخلفية. اكتب على الورق اسم السلالة والتاريخ ودرجة حرارة الحضانة والوقت من خطوط اللوحة الأولى. التقط صورة رقمية (صور) للوحة مع المعلومات الأخيرة المكتوبة على خلفية الورق بحيث يتم تقليل الالتباس.
ملاحظه: يمكن اقتصاص الكتابة من الصورة في وقت لاحق إذا كان سيتم استخدامها لإعداد الشكل.
