اختبار سائل متعدد الآبار لفحص C. ايليجانس الضربة القاضية

Abstract

المصدر: أندرسون ، كيو إل وآخرون. نظام C. elegans Pathosystem عالي الإنتاجية وعالي المحتوى وقائم على السائل. J. Vis. خبرة. (2018)

يوضح هذا الفيديو طريقة فحص عالية الإنتاجية باستخدام Caenorhabditis elegans لدراسة ضربات قاضية للجينات أثناء تفاعلات المضيف والعامل الممرض. يحدد إجراء تحضير الديدان القاضية ونقلها إلى ألواح الفحص لتقييم آثار قتل الديدان التي يسببها مسببات الأمراض.

Protocol

1. التكيف لفحص سلالات أو ضربات قاضية متعددة لالتهاب الكينورابديتس (إعداد شاشة تداخل الحمض النووي الريبي (RNAi))

ملاحظه: هذه شاشة RNAi موصوفة لإعداد لوحة 24 بئرا.

1. أضف 1 مل من S Basal لكل بئر من صفيحة 24 بئرا تحتوي على ديدان مزروعة بالحمض النووي الريبي. قم بتحريك الديدان برفق عن طريق هز اللوحة ، ثم انقل الديدان إلى طبق فارغ ومعقم 24 بئرا عميقة. اسمح للديدان بالاستقرار بالجاذبية (~ 5 دقائق).
2. شفط الطافق ، تاركا حوالي 1 مل. أضف 7 مل من S Basal إلى كل بئر.
3. كرر الخطوات من 1.1 إلى 1.2 على الأقل مرتين أخريين. بعد الغسيل النهائي ، استنشق الطافية ، تاركا حوالي 400 ميكرولتر.
4. باستخدام وظيفة Resampler لفرز الدودة ، قم بفرز 22 دودة من تعليق دودة اللوحة المكون من 24 بئرا في كل بئر من صفيحة 384 بئرا (ينتج كل بئر من صفيحة 24 بئرا 8-12 بئرا من صفيحة 384 بئرا).
   1. لتجنب الجوع ، قم بتحويل بكتيريا الماصة إلى صفيحات مكونة من 384 بئرا (إما سلالة تعمل فقط كغذاء ، مثل OP50 ، أو سلالة مسببة للأمراض) قبل الفرز.
5. بعد فرز الديدان في صفيحة 384 بئرا ، أضف جزيئات صغيرة أو مواد أخرى خاصة بالتجربة.

Materials