اختبار سائل متعدد الآبار لفحص C. ايليجانس الضربة القاضية

الملخص

المصدر: أندرسون ، كيو إل وآخرون. نظام C. elegans Pathosystem عالي الإنتاجية وعالي المحتوى وقائم على السائل. J. Vis. خبرة. (2018)

يوضح هذا الفيديو طريقة فحص عالية الإنتاجية باستخدام Caenorhabditis elegans لدراسة ضربات قاضية للجينات أثناء تفاعلات المضيف والعامل الممرض. يحدد إجراء تحضير الديدان القاضية ونقلها إلى ألواح الفحص لتقييم آثار قتل الديدان التي يسببها مسببات الأمراض.

البروتوكول

1. التكيف لفحص سلالات أو ضربات قاضية متعددة لالتهاب الكينورابديتس (إعداد شاشة تداخل الحمض النووي الريبي (RNAi))

ملاحظه: هذه شاشة RNAi موصوفة لإعداد لوحة 24 بئرا.

1. أضف 1 مل من S Basal لكل بئر من صفيحة 24 بئرا تحتوي على ديدان مزروعة بالحمض النووي الريبي. قم بتحريك الديدان برفق عن طريق هز اللوحة ، ثم انقل الديدان إلى طبق فارغ ومعقم 24 بئرا عميقة. اسمح للديدان بالاستقرار بالجاذبية (~ 5 دقائق).
2. شفط الطافق ، تاركا حوالي 1 مل. أضف 7 مل من S Basal إلى كل بئر.
3. كرر الخطوات من 1.1 إلى 1.2 على الأقل مرتين أخريين. بعد الغسيل النهائي ، استنشق الطافية ، تاركا حوالي 400 ميكرولتر.
4. باستخدام وظيفة Resampler لفرز الدودة ، قم بفرز 22 دودة من تعليق دودة اللوحة المكون من 24 بئرا في كل بئر من صفيحة 384 بئرا (ينتج كل بئر من صفيحة 24 بئرا 8-12 بئرا من صفيحة 384 بئرا).
   1. لتجنب الجوع ، قم بتحويل بكتيريا الماصة إلى صفيحات مكونة من 384 بئرا (إما سلالة تعمل فقط كغذاء ، مثل OP50 ، أو سلالة مسببة للأمراض) قبل الفرز.
5. بعد فرز الديدان في صفيحة 384 بئرا ، أضف جزيئات صغيرة أو مواد أخرى خاصة بالتجربة.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
COPAS FP BioSorter	يونيون بيومتريكا		مقياس تدفق الجسم الكبير / فارز الدودة
24 كتلة RB عميقة	ثيرمو فيشر العلمي	CS15124
384-لوحة بئر	غرينر بيو ون	رقم القدم - 781091
وسائط نمو الديدان الخيطية (NGM)			الكمية لكل لتر: 18 جرام أجار ، 3 جرام كلوريد الصوديوم ، 2.5 جرام بيبتون ، 1 مل كلوريد الكالسيوم (1 م) ، 1 مل كبريتات المغنيسيوم (1 م) ، 25 مل من الفوسبات العازلة ، و 973 مل من الماء ملي كيو
إس بازال			الكمية لكل لتر: 5.85 جرام كلوريد الصوديوم ، 6 جرام فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدة ، 1 جرام فوسفات البوتاسيوم ثنائي القاعدة ، و 1 لتر من الماء ملي كيو
اجار	USBعلوم الحياة	أ 0930
كلوريد الصوديوم	USBعلوم الحياة	إس 5000
الببتون	USBعلوم الحياة	ص 3300
كلوريد الكالسيوم	USBعلوم الحياة
كبريتات المغنيسيوم	فيشر العلمية	إم 63-500
عازلة الفوسبات			الكمية لكل لتر: 132 مل من فوسفات البوتاسيوم ثنائي القاعدة (1 متر) و 868 مل من فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدة (1 مل)
فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدة	أكروس أورجانيكس	7778-77-0
فوسفات البوتاسيوم ثنائي القاعدة	USBعلوم الحياة	ص 5100
السلالات البكتيرية
المتصورة الزنجارية (PA14)
الإشريكية القولونية سوبرفود (OP50)
بكتريا قولونية RNAi معبسة عن البكتيريا (HT115)
سلالة الدودة
glp-4 (bn2) (Beanan and Strom ، 1992 ، PMID: 1289064)