التعبير عن أوبرون اللمعان في البكتيريا البحرية المضيئة بيولوجيا

الملخص

المصدر: Brodl, E., et al. في الموقع قياس وارتباط كثافة الخلايا وانبعاث الضوء للبكتيريا المضيئة بيولوجيا. J. Vis. خبرة. 1 (2018)

يوضح هذا الفيديو زراعة البكتيريا البحرية المضيئة بيولوجيا لمراقبة تنشيط الاكتتاب بوساطة استشعار النصاب لمشغل اللمعان ، مما يتيح المراقبة في الوقت الفعلي للتعبير الجيني وانبعاث الضوء للدراسات في الاتصالات الميكروبية وتنظيم الجينات.

البروتوكول

1. التعبير عن سلالات البكتيريا المضيئة بيولوجيا

ملاحظه: تتطلب السلالات البكتيرية المضيئة بيولوجيا وسيطا محددا للنمو وإنتاج الضوء وسط نمو / مياه البحر الاصطناعية.

1. قم بإعداد وسط اصطناعي لمياه البحر ، يتكون من مكونين متوسطين معدين بشكل منفصل.
   ملاحظه: الكميات التالية هي 1 لتر من الوسط السائل أو 1 لتر من وسط أجار.
   1. بالنسبة لوسط مياه البحر الاصطناعي ، قم بوزن الأملاح التالية: 28.13 جم كلوريد الصوديوم (كلوريد الصوديوم) ، 0.77 جم KCl (كلوريد البوتاسيوم) ، 1.60 جم CaCl₂ · 2H₂O (ثنائي هيدرات كلوريد الكالسيوم) ، 4.80 جم MgCl₂ · 6H₂O (سداسي هيدرات كلوريد المغنيسيوم) ، 0.11 جم NaHCO₃ (بيكربونات الصوديوم) ، و 3.50 جم MgSO₄ · 7H₂O (كبريتات المغنيسيوم سباعي الهيدرات).
   2. أضف 1 لتر من الماء المقطر وقم بإذابة جميع المكونات.
   3. بالنسبة لوسط LB (Luria-Bertani) ، قم بوزن المكونات التالية: 10 جم من مستخلص الخميرة ، و 10 جم بيبتون ، وبالنسبة لألواح الأجار ، 20 جم أجار إضافية.
   4. أضف 250 مل من ماء الصنبور وقم بإذابة المكونات.
   5. الأوتوكلاف كلتا الوسائط المحضرة بشكل منفصل عند 121 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.
   6. بالنسبة لألواح أجار ، امزج 250 مل من وسط LB مع 750 مل من وسط مياه البحر الاصطناعي مباشرة بعد التعقيم وإعداد الألواح.
   7. بالنسبة للوسط السائل ، امزج 250 مل من وسط LB مع 750 مل من وسط مياه البحر الاصطناعي إما مباشرة بعد التعقيم أو عند تبريده.
      ملاحظه: قد يصبح وسط مياه البحر الاصطناعي عكرا من خلال هطول الأمطار الملحية.
2. ضع سلالات البكتيريا المضيئة بيولوجيا على ألواح أجار متوسطة من مياه البحر الاصطناعية واحتضنها طوال الليل عند 24 - 30 درجة مئوية.
   ملاحظه: عادة ما يتم التخزين طويل الأجل للسلالات البكتيرية من خلال تجميد مخزونات الجلسرين في المزرعة البكتيرية. يجب دائما وضع سلالات مخططة على ألواح أجار أولا لضمان ظروف بدء موحدة لجميع السلالات ، قبل استخدامها للمزارع السائلة ، بسبب مرحلة التأخر في النمو بعد الذوبان.
3. قم بإعداد ONC (مزرعة ليلية) عن طريق تلقيح 100 مل من وسط مياه البحر الاصطناعي بمستعمرة واحدة من اللوحة. احتضان ONC عند 24 - 30 درجة مئوية و 120 دورة في الدقيقة في شاكر حاضنة طوال الليل.
4. تلقيح 800 مل من وسط مياه البحر الاصطناعي ب 8 مل من ONC.
5. احتضان الخلايا البكتيرية عند 24 - 30 درجة مئوية و 120 دورة في الدقيقة في شاكر الحاضنة.
   ملاحظه: يختلف ملف شدة الضوء للبكتيريا المضيئة بيولوجيا بشدة باختلاف درجة الحرارة. اعتمادا على الآليات التنظيمية لإنتاج الضوء للسلالة البكتيرية المعنية ، قد يبدأ انبعاث الضوء بعد حوالي 1-6 ساعات.
6. راقب ثقافة الخلايا البكتيرية حتى تبدأ في التألق (حوالي 1-6 ساعات).
   ملاحظه: اعتمادا على الغرض من التعبير ، تنمو الخلايا حتى اليوم التالي ثم يتم حصادها ، أو يمكن الحفاظ على اهتزاز الخلايا طالما أنها مشرقة. يمكن حصاد الخلايا وتنقية أي بروتينات وفقا للإجراءات القياسية.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
Multitron حاضنة قياسية شاكر	إنفورس إيه جي