الكشف اللوني عن تدهور القشرة أثناء إنبات الأبواغ البكتيرية

الملخص

المصدر: فرانسيس ، إم بي ، وآخرون. الكشف عن شظايا القشرة أثناء إنبات الأبواغ البكتيرية. J. Vis. خبرة. (2016).

يوضح هذا الفيديو طريقة قياس الألوان للكشف عن تدهور القشرة أثناء إنبات الأبواغ البكتيرية عن طريق قياس إطلاق السكريات المختزلة بمرور الوقت. باستخدام معايير N-acetylglucosamine وعينات النقطة الزمنية ، يحدد الفحص تركيز السكر من خلال تفاعل كروموجينيك أرجواني ، مما يشير إلى مدى التحلل المائي للقشرة.

البروتوكول

1. كاشف اللون

1. أثناء وضع العينات على الجليد ، قم بإعداد كاشف اللون. إذابة 0.320 غرام من p-ثنائي ميثيل أمينوبينزالديهايد (DMAB; كاشف إيرليش) في 1.9 مل من حمض الخليك الجليدي.
   ملاحظه: الكاشف حساس للوقت ودرجة الحرارة والضوء ولا ينبغي صنعه مسبقا.
2. بعد أن يذوب DMAB تماما ، أضف 100 ميكرولتر من 10 نيوتن حمض الهيدروكلوريك والدوامة.
3. أضف 5 مل من حمض الخليك الجليدي والدوامة.

2. التفاعل اللوني

1. انقل 100 ميكرولتر من كل عينة قشرة مبردة إلى أنبوب طرد مركزي دقيق جديد سعة 1.5 مل.
2. أضف 700 ميكرولتر من محلول الألوان المحضر حديثا لكل عينة.
3. انقل العينات على الفور إلى حمام مائي بدرجة حرارة 37 درجة مئوية واحتضنها لمدة 20 دقيقة بالضبط.
4. انقل 200 ميكرولتر من كل عينة إلى صفيحة شفافة سعة 96 بئرا.
5. حدد العينات عند 585 نانومتر على قارئ اللوحة. يجب أن تبدأ العينات باللون الأصفر وسيتحول رد الفعل الإيجابي إلى اللون الأرجواني. كلما زاد عدد القشرة ، كلما كان اللون الأرجواني أعمق.

المواد