Method Article

الزخرفة الدقيقة والتتبع القائم على التألق لنمو البكتيريا أحادية الخلية

October 30th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Pioli، R.، et al.، Patterning of Microorganisms والجسيمات الدقيقة من خلال التجميع المتسلسل بمساعدة الشعيرات الدموية. J. Vis. خبرة. (2021)

يوضح هذا الفيديو طريقة التقاط خلايا الإشريكية القولونية المفردة الموسومة بالفلورسنت (E. coli) في مصائد الموائع الدقيقة باستخدام تعليق خال من الكربون وتدفق متحكم فيه ، متبوعا بإضافة المغذيات لتحفيز النمو والتصوير الفلوري للمستعمرات الدقيقة.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. الزخرفة البكتيرية

  1. قبل يوم واحد من التجربة ، قم بزيادة عدد من الإشريكية القولونية (سلالة MG1655 prpsM-GFP). قم بتلقيح المزرعة مباشرة من المرق المجمد وتنمو طوال الليل لمدة 20 ساعة في وسط مرق ليزوجين (LB) في حاضنة شاكر عند 37 درجة مئوية. أضف 50 ميكروغرام / مل من الكاناميسين للخلايا للاحتفاظ ببلازميد prpsM-GFP (البروتين الفلوري الأخضر).
  2. في يوم التجربة ، اضبط حاضنة الصندوق (الشكل 1 أ) على 37 درجة مئوية قبل عدة ساعات من التجربة لضمان درجة حرارة موحدة ومستقرة قبل البدء. بعد ذلك ، قم بإعداد مضخة الحقنة واللوحة الزجاجية الساخنة على مرحلة المجهر (الشكل 1 ب ، ج) ، وضبط درجة الحرارة على نفس درجة حرارة حاضنة الصندوق.
    ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
figure-results-1

الشكل 1: تخطيطي لمنصة التجميع المتسلسل بمساعدة الشعيرات الدموية في قناة الموائع الدقيقة. (أ) حاضنة الصندوق. تحافظ حاضنة الصندوق على درجة حرارة موحدة وثابتة (هنا ، 30 درجة مئوية) داخل قناة الموائع الدقيقة. (ب) حقنة محملة بتعليق سائل. يتم التح.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
حقنة 10 مل من دينار بحريني (Luer-Lock)دينار بحريني300912يستخدم لطرد مرق Lysogeny الطازج في قناة الموائع الدقيقة
حاضنة صندوقخدمات تصوير الحياة تستخدم لضمان درجة حرارة موحدة وثابتة في القناة
الطرد المركزيإيبندورف5424صتستخدم لاستبدال الوسائط الليلية بوسائط جديدة
قارورة الطرد المركزيإيبندورف301200861.5 مل
قاعدة سيتوني 120شركة سيتوني المحدودة مضخة حقنة
وحدة التحكم H401-Tأوكولاب وحدة تحكم في اللوحة الزجاجية المسخنة
H601-نيكون-TS2R-زجاجأوكولاب صفيحة زجاجية ساخنة
محاقن الأنسولين ، U 100 ، مع لوركودان الطبية APSCODA621640حقنة 1 مل تستخدم لسحب التعليق السائل أثناء عملية الزخرفة
مرق LB ، ميلر (لوريا بيرتاني)فيشر العلمية244610مرق ليسوجين يتدفق في قناة الموائع الدقيقة
أنابيب نقل Masterflexماسترفليكسالرقم HV-06419-050.020 '' معرف ، 0.06 '' OD
المماسح (10x)تكنوفام 2101مخفف عشرة أضعاف بالماء مليكيو ويستخدم لاستبدال الوسط بين عشية وضحاها
نيكون اكليبس Ti2آلات نيكون مجهر
فوسفات البوتاسيوم ثنائي القاعدةسيجما ألدريتشص 3786تمت الإضافة إلى MOPS 1x
المراهقين 20سيجما ألدريتشص 1379تستخدم لضمان انحسار زاوية التلامس المثلى أثناء عملية الزخرفة

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Microfluidic PatterningBacterial Growth TrackingFluorescence MicroscopyCapillary AssemblySingle Cell AnalysisMicrofluidic TrapsCarbon Free BufferNutrient Induced GrowthTime Lapse ImagingE coli Culture

Related Articles