تصور التفاعلات البكتيرية أحادية الخلية

الملخص

المصدر: Yarringto, K. D., et al. التصور الحركي للتفاعلات البكتيرية بين الأنواع أحادية الخلية. J. Vis. خبرة. (2020)

يوضح هذا الفيديو تحضير نظام الزراعة المشتركة باستخدام البكتيريا المتحركة وغير المتحركة تحت وسادة الاغاروز لتصوير الخلايا الحية. يوضح كيف تكتشف البكتيريا المتحركة الجاذبات الكيميائية وتغزو المستعمرات غير المتحركة ، وتكشف عن التفاعلات البكتيرية.

البروتوكول

1. تحضير الخلايا البكتيرية ومنصات التلقيح

1. قم بقياس الكثافة البصرية ، OD₆₀₀ ، لكل ثقافة فرعية وقم بتخفيف Pseudomonas aeruginosa إلى OD₆₀₀ = 0.03 والمكورات العنقودية الذهبية إلى OD₆₀₀ = 0.10 في M8T (الحد الأدنى من المتوسط 8 + التربتون) المسخن مسبقا إلى 37 درجة مئوية. امزج P. aeruginosa و S. aureus بنسبة 1: 1 والدوامة.
   ملاحظه: إذا كانت السلالات تتطلب مضادات حيوية ، فيمكن إضافتها إلى الثقافة بين عشية وضحاها ، ولكن لا ينبغي إضافتها عند خلط الأنواع للتصوير إذا كانت تؤثر على الأنواع الأخرى في الزراعة المشتركة. يجب تحديد استقرار البلازميد وتأثيرات المضادات الحيوية على جميع الأنواع في الاستزراع المشترك لكل كائن حي / بلازميد مستخدم.
2. ماصة 1 ميكرولتر من الزراعة المشتركة بالتساوي عبر قاع طبق غطاء زجاجي معقم 35 مم مسخن مسبقا.
3. قم بإزالة فتحة السيليكون من القالب باستخدام ملاقط معقمة.
4. أخرج الوسادة من الطبق باستخدام ملاعق معقمة.
   1. حرك الملعقة المثنية قليلا أسفل حافة الوسادة مع إمساك القالب رأسا على عقب لإسقاطه على غطاء صفيحة بتري معقم.
      ملاحظه: لا تجبر الوسادة على الخروج ، وإلا ستمزق. تتبع أي جانب من الوسادة هو الجزء السفلي.
5. انقل الوسادة إلى الطبق مع الخلايا البكتيرية ، من الأسفل إلى الأسفل ، عن طريق تحريك الملعقة بزاوية 90 درجة أسفل الوسادة ووضعها فوق الغطاء الملقح. استخدم الملعقة بزاوية 90 درجة لجعل الوسادة تتدفق على الغطاء واضغط برفق على أي فقاعات هواء.
6. قم بإزالة الرطوبة الزائدة من المناديل المبللة وضعها حول حافة الطبق ، مع التأكد من أنها لا تلمس الوسادة. العينة جاهزة الآن للتصوير.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
وسادات الاغاروز
طبق زجاجي سفلي 35 مم مع بئر صغير 20 مم مع غطاء زجاجي 1.5	سيلفيس	D35-20-1.5-N	واحد لقوالب وسادة الاغاروز ، وواحد للتجربة
ملاعق مدببة مستديرة	VWR	82027-530
عازل السيليكون ، اضغط على الختم ، 1 بئر ، قطر 2.0 مم ، 20 مم ، سيليكون / لاصق	سيجما ألدريتش	ط6685-25EA	لقوالب وسادة الاغاروز
الملقط	VWR	89259-944
M8T الحد الأدنى من الوسائط
د (+) جلوكوز	RPI	جي 32045
KH₂PO₄	RPI	P250500
MgSO₄	سيجما ألدريتش	208094
كلوريد الصوديوم	RPI	ط23025
Na₂HPO₄·7H₂O	سيجما ألدريتش	230391
التربتون	BD Biosciences	DF0123173
السلالات البكتيرية
الزائفة الزنجارية PA14 (WT) pSMC21 (Ptac-GFP)	بميد: 9361441
المكورات العنقودية الذهبية USA300 LAC (وزن)	بميد: 23404398		سلالة مقاومة USA300 CA-Methicillin LAC بدون بلازميدات