مقالة منهجية

تنقية بروتينات المجال P المؤتلف المشتقة من البكتيريا من نوروفيروس بشري

أكتوبر 30, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Leuthold, M. M., et al. إنتاج المجالات البارزة لفيروس نوروفيروس البشري في الإشريكية القولونية لعلم البلورات بالأشعة السينية. J. Vis. خبرة. (2016).

يوضح هذا الفيديو تنقية مجال نوروفيروس بشري المؤتلف P باستخدام كروماتوغرافيا استبعاد الحجم ، مع تسليط الضوء على فصل البروتين المستهدف عن الشوائب ذات الوزن الجزيئي الأعلى والمنخفض بناء على إمكانية الوصول التفاضلي إلى المسام. تتم مراقبة العملية عن طريق امتصاص الأشعة فوق البنفسجية ويتم تأكيدها من خلال تحليل SDS-PAGE للكسور الممسولة.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. 3 خطوة التنقية

  1. اغسل مضخات وأنابيب نظام تنقية HPLC (كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء) وقم بموازنة عمود SEC (كروماتوغرافيا استبعاد الحجم) (انظر قائمة المواد) باستخدام GFB (مخزن الترشيح الهلامي).
  2. قم بحقن المجال P في العمود بمعدل تدفق 1 مل / دقيقة باستخدام حلقة فائقة (حتى 12 مل) أو حلقة (حتى 3 مل) ، اعتمادا على حجم العينة المركزة. بعد الانتهاء من الحقن ، قم بزيادة معدل التدفق إلى 2.5 مل / دقيقة.
  3. مع زيادة OD (الكثافة الضوئية) وخروج المجال P من العمود ، اجمع كسورا بحجم 1.5 مل. تحقق من الكسور باستخدام SDS-PAGE باستخدام مادة هلامية بنسبة 12٪ (الشكل 1A و 1B). قم بتجميع أنقى الكسور فقط وركز إلى ~ 3 مجم / مل و ~ 8 مجم / مل.
    ملاحظة: بعد ~ 110 مل (حجم فارغ) ، يتم إزالة معظم الشوائب من عمود SEC بحجم سرير 320 مل. عادة ما يتم مسح المجال P كثنائي يعتمد وقت / حجم الشطف لثنائي المجال P على درجة الإعداد (pg) لعمود SEC.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
figure-results-1

الشكل 1. النتائج التخطيطية والتمثيلية لخطوة التنقية الثالثة.
الرسم الكروماتوغرافي لشطف المجال P باستخدام SEC ونتيجة SDS-PAGE المقابلة. تشير الأرقام السوداء إلى الكسور التي يتم جمعها. أ) تخطيطي للفصل على عمود SEC (يتم تصوي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
P المجال DNAتقنيات الحياة تخليق الجينات GeneArt
فيفابين 20جنرال إلكتريك للرعاية الصحيةمختلفقطع 10 كيلو دالتون و 30 كيلو دالتون و 50 كيلو دالتون مستخدمة
هاي لود 26/600 سوبرديكس 75 PGجنرال إلكتريك للرعاية الصحية28-9893-34عمود SEC

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

P SDS PAGE

مقالات ذات صلة