قياس ارتباط الدواء بالجسام من آفات السل عبر طريقة غسيل الكلى بالتوازن السريع

الملخص

المصدر: Sarathy، J. P. et al. مقايسة ربط الجبال في المختبر التي تتنبأ باختراق الدواء في آفات السل. J. Vis. خبرة. (2017)

يوضح هذا الفيديو مقايسة في المختبر لقياس ارتباط الدواء بالجبن من آفات السل باستخدام غسيل الكلى السريع بالتوازن السريع. يحدد خطوات تحضير معلقات الجبن ، وإجراء غسيل الكلى ، وحساب جزء الدواء غير المرتبط للتنبؤ بتغلغل الدواء في الجبن.

البروتوكول

1. فحص غسيل الكلى بالتوازن السريع (RED)

1. قم بزيادة 6.5 ميكرولتر من محلول 500 ميكرومتر لمركب الاختبار إلى 643.5 ميكرولتر من المتجانس لتحقيق التركيز النهائي البالغ 5 ميكرومتر (≤1٪ DMSO) والدوامة.
2. ضع إدخالات RED في لوحة القاعدة. أضف 200 ميكرولتر من المصفوفة المسننة بالدواء في غرفة المتبرع (الحلقة الحمراء) لكل ملحق أحمر و 350 ميكرولتر من المحلول الملحي المخزن بالفوسفات (PBS) في كل غرفة مستقبل. قم بإعداد 3 إدخالات لكل مركب اختبار (عينات ثلاثية). أغلق اللوحة بختم لوح لاصق واحتضنه عند 37 درجة مئوية على الخلاط الحراري عند 200 دورة في الدقيقة (1 × جم) لمدة 4 ساعات.
3. بعد الحضانة ، امزج محتويات غرف المتبرع والمستقبل برفق عن طريق سحب العينة لأعلى ولأسفل 2-3 مرات. قم بإخراج 20 ميكرولتر من التجانس من الغرف المانحة وأضف إلى 20 ميكرولتر من PBS النظيف في أنبوب 1.5 مل (1: 1). وبالمثل ، قم بإخراج 20 ميكرولتر من عينات PBS من غرف الاستقبال وإضافة إلى 20 ميكرولتر من التجانس النظيف (مطابقة المصفوفة).
   ملاحظه: تلغي مطابقة المصفوفة الحاجة إلى منحنيات معايرة منفصلة (في التجانس و PBS) ليتم إجراؤها للتحليل الكمي. قد تترسب محتويات الغرفة المانحة بمرور الوقت. امزج المحتويات برفق عن طريق سحب العينة قبل إزالة الأغطية الصغيرة.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
لوحة قاعدة قابلة لإعادة الاستخدام لجهاز بيرس RED	فيشر العلمية	بي-89811
إدراج جهاز بيرس ريد ، 50 / صندوق	فيشر العلمية	بي-89809
أداة إزالة إدراج Pierce RED	فيشر العلمية	89812
ختم لوحة لاصقة	فيشر العلمية	08-408-240
PBS ، درجة الحموضة 7.4 ، 10 × 500 مل (جيبكو)	تقنيات الحياة	10010-049
DMSO	سيغما	472301