تحضير ثقافة السالمونيلا التيفيموريوم

الملخص

المصدر: Gutiérrez، S.، et al.، عزل البلعمات المحتوية على السالمونيلا التيفيموريوم من البلاعم. J. Vis. خبرة. (2017)

يوضح هذا الفيديو زراعة وتحضير السالمونيلا التيفيموريوم للحصول على معلق بكتيري نظيف ونشط أيضيا ومناسب للاستخدام التجريبي.

البروتوكول

يجب تنفيذ جميع الخطوات التي تنطوي على استخدام السالمونيلا التيفيموريوم المسببة للأمراض في منشأة BSL-2 (مستوى السلامة الحيوية 2) أو مستوى أعلى من الأمن البيولوجي.

1. زراعة السالمونيلا التيفيموريوم

1. تلقيح السالمونيلا التيفيموريوم (سلالة SL1344) من مستعمرة بكتيرية واحدة في 5 مل من مرق ضخ القلب في الدماغ (BHI) باستخدام حلقة بكتيرية.
2. احتضان المعلق البكتيري في حاضنة عند 37 درجة مئوية طوال الليل مع الرج.
3. في اليوم التالي ، انقل 1 مل من المعلق البكتيري إلى 19 مل من مرق BHI في قارورة مخروطية واحتضان عند 37 درجة مئوية في حاضنة مع الاهتزاز.
4. راقب نمو S. typhimurium عن طريق قياس الكثافة الضوئية (OD) عند 600 نانومتر (OD₆₀₀) باستخدام مقياس الطيف الضوئي. يجب أخذ القياسات كل 30 دقيقة تقريبا.
5. عندما يصل OD₆₀₀ إلى 1.0 ، قم بإزالة المعلق البكتيري من الحاضنة ونقله إلى أنبوب 50 مل. بكتيريا الطرد المركزي عند 5,400 × جم لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية.
6. قم بإزالة المادة الطافية وأعد تعليقها في 10 مل من المحلول الملحي المعقم المخزن بالفوسفات (PBS).
7. جهاز طرد مركزي عند 5,400 × جم لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية.
8. قم بإزالة المادة الطافية وأعد تعليق البكتيريا في 4.9 مل من PBS المعقم.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
MgCl₂	كارل روث	أ 537.4
سكروز	كارل روث	4621.1
مانيتول	كارل روث	4175.1
مقياس الطيف الضوئي SmartSpec 3000	بيو راد	170-2501
حلقة بكتيرية (10 ميكرولتر)	سارستيدت	86.1562.010
السالمونيلا المعوية المصلية Typhimurium إس إل 1344	معهد لايبنيز DSMZ - مجموعة ألمانية من الكائنات الحية الدقيقة ومزارع الخلايا
PBS (محلول ملحي مخزن بالفوسفات)	بيوكروم	L1825