$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. زراعة المستدمية النزلية غير القابلة للكتابة (NTHi) وتحضير اللقاح
- ضع الطبق NTHi على طبق أجار الشوكولاتة واحتفظ بالطبق رأسا على عقب في حاضنة ثاني أكسيد الكربون2 المرطبة طوال الليل عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون2. في اليوم التالي ، قم بزراعة البكتيريا في مرق ضخ القلب في الدماغ. ثم أضف 1 مل من المرق إلى أنبوب معقم سعة 1.5 مل.
- جهاز طرد مركزي عند 4,000 × جم لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ثم, تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق الحبيبات في 1 مل من المحلول الملحي المعقم 1x الفوسفات (PBS). كرر هذه الخطوة مرة واحدة.
- انقل 100 ميكرولتر من المحلول المعاد تعليقه إلى 900 ميكرولتر من 1x PBS وقم بقياس امتصاص المزرعة المخففة عند الطول الموجي 600 نانومتر في مقياس الطيف الضوئي.
- تحديد الجدوى ووحدات تشكيل المستعمرة (CFUs) للتلقيح عن طريق زراعة التخفيفات التسلسلية 1:10 على ألواح أجار الشوكولاتة واحتضانها طوال الليل عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون2.
- بناء على الجدوى و CFUs المحددة من الخطوة السابقة ، اضبط اللقاح على تركيز نهائي قدره 20 × 106 CFU / مل.