زراعة المستدمية النزلية غير القابلة للكتابة

الملخص

المصدر: Venuprasad، K. et al. ، الإدارة داخل القصبة الهوائية للمستدمية النزلية في نماذج الفئران لدراسة التهاب مجرى الهواء. J. Vis. خبرة. (2016)

يوضح هذا الفيديو زراعة المستدمية النزلية غير القابلة للكتابة وإعداد لقاح موحد بالجرعة لدراسات الاستعمار أو العدوى.

البروتوكول

1. زراعة المستدمية النزلية غير القابلة للكتابة (NTHi) وتحضير اللقاح

1. ضع الطبق NTHi على طبق أجار الشوكولاتة واحتفظ بالطبق رأسا على عقب في حاضنة ثاني أكسيد الكربون₂ المرطبة طوال الليل عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون₂. في اليوم التالي ، قم بزراعة البكتيريا في مرق ضخ القلب في الدماغ. ثم أضف 1 مل من المرق إلى أنبوب معقم سعة 1.5 مل.
2. جهاز طرد مركزي عند 4,000 × جم لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ثم, تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق الحبيبات في 1 مل من المحلول الملحي المعقم 1x الفوسفات (PBS). كرر هذه الخطوة مرة واحدة.
3. انقل 100 ميكرولتر من المحلول المعاد تعليقه إلى 900 ميكرولتر من 1x PBS وقم بقياس امتصاص المزرعة المخففة عند الطول الموجي 600 نانومتر في مقياس الطيف الضوئي.
4. تحديد الجدوى ووحدات تشكيل المستعمرة (CFUs) للتلقيح عن طريق زراعة التخفيفات التسلسلية 1:10 على ألواح أجار الشوكولاتة واحتضانها طوال الليل عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون₂.
5. بناء على الجدوى و CFUs المحددة من الخطوة السابقة ، اضبط اللقاح على تركيز نهائي قدره 20 × 10⁶ CFU / مل.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
طبق أجار الشوكولاتة	فيشر العلمية	مواصفات الخبراء القابضة 50-99-7
1.5 مل أنبوب الطرد المركزي الدقيق	مختبرات الضوء	أ - 7001 - آر
1X PBS	جيبكو	10010-023