مجموعة سوائل الغسيل القصبية السنخية من نموذج فأر مصاب بالمستدمية النزلية غير القابلة للكتابة

الملخص

المصدر: Venuprasad, K., et al. إعطاء المستدمية النزلية داخل القصبة الهوائية في نماذج الفئران لدراسة التهاب مجرى الهواء. J. Vis. خبرة. (2016)

يوضح هذا الفيديو جمع ومعالجة سائل الغسيل القصبي السنخي من فأر تم القتل الرحيم مصاب بالمستدمية النزلية غير القابلة للكتابة لتحليلها النهائي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. مجموعة سائل الغسيل القصبي السنخي (BALF)
   1. التضحية بالفأر عن طريق خلع عنق الرحم بعد 24 ساعة من الإصابة.
   2. افتح تجويف بطن الفأر بمقص تشريحي ، وقطع الشريان الأورطي البطني للنزيف ، وفضح الجزء البطني من الرئة.
   3. كشف القصبة الهوائية وتنبيبها بقسطرة قياس 20. غرس 0.8 مل من محلول BALF (1x PBS (محلول ملحي مخزن فوسفات) ، 0.1٪ سكر العنب ، 10 وحدة / مل هيبارين) واجمع الغسيل عن طريق الشفط اللطيف. كرر هذا الإجراء ثلاث مرات.
   4. احسب العدد الإجمالي للخلايا في 100 ميكرولتر من تعليق BALF باستخدام مقياس الخلايا الدموية تحت تكبير 10X مع تلطيخ Trypan Blue.
   5. قم بإعداد شرائح لتلطيخ Giemsa المعدل. أليكوت 100 ميكرولتر من BALF في الآبار المناسبة للخلوية وأجهزة الطرد المركزي عند 500 × جم لمدة 5 دقائق. جفف الشرائح لمدة 10 دقائق وقم بتلطيخ الخلايا باستخدام صبغة Giemsa المعدلة وفقا لبروتوكولات الشركة المصنعة.
   6. يمكن استخدام الخلايا المتبقية للتحليل اللاحق ، مثل فرز الخلايا المنشطة بالتألق (FACS) ، والفحص المجهري متحد البؤر ، والتعبير الجيني ، واللطخة الغربية.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
سكر العنب اللامائي	ثيمو العلمي	R01300
الهيبارين	هوسبيرا ، إنك	RL-3010
إبرة حقنة 20/26 جرام	دينار بحريني	(REF305115/175)
1 مل حقنة	دينار بحريني	المرجع 309602
قسطرة 20 جيجا	دينار بحريني	المرجع 381433
ملاقط # 5 ستانلس ستيل ، بطول 11 سم	كينت سايفاينتيك	INS600095
5 مل أنابيب البوليسترين المستديرة القاع	دينار بحريني	المرجع 352058
1.5 مل أنابيب الطرد المركزي الدقيقة	مختبرات الضوء	أ - 7001 - آر
1X PBS (محلول ملحي مخزن الفوسفات)	جيبكو	10010-023
مخزن تحلل كرات الدم الحمراء (10X)	بيوليجند	420301