تنقية تدرج الكثافة للكريات البلاستوبكتيرية الزرقاء

في هذه المقالة

الملخص

المصدر: Shivaiah, K., et al. عزل قطرات دهون Plastoglobule من أنسجة أوراق النبات والبكتيريا الزرقاء. J. Vis. خبرة. (2022).

يوضح هذا الفيديو عزل البكرات البلازمية عن البكتيريا الزرقاء باستخدام الطرد المركزي المتدرج بكثافة السكروز ، مما يسلط الضوء على طبيعتها الغنية بالدهون ومنخفضة الكثافة وضمان الحفاظ عليها الهيكلية لتحليل المصب.

البروتوكول

1. حصاد البلوبولات النقية

معالجة البكتيريا الزرقاء
1. أنتج تدرج السكروز في أربعة أنابيب للطرد المركزي الفائق سعة 2.5 مل مرتبة أولا مع 500 ميكرولتر من الكريات البلاستوبولية الخام من الخطوة 1.3 ممزوجة ب 750 ميكرولتر من R 0.7 متوسط ، ثم تراكب ب 750 ميكرولتر من R 0.2 متوسط (الجدول 1)
2. قم بالطرد المركزي لتدرج السكروز عند 150،000 × جم لمدة 90 دقيقة عند 4 درجات مئوية. اجمع الجلوبولات النقية (الشكل 1 ج) بحقنة وإبرة 22 جم من المرحلة العلوية من تدرج السكروز ونقلها إلى أنبوب 1.5 مل.
3. Aliquot الجلوبولات البلاستوبولية النقية والتجميد السريع في النيتروجين السائل. يحفظ مباشرة في درجة حرارة -80 درجة مئوية أو يجفف بالتجميد إلى مسحوق جاف.

الجدول 1: وصفات عازلة لعزل البلوبول من البكتيريا الزرقاء.

متوسط R	50 ملي مولار هيبس كوه (درجة الحموضة 8.0)
متوسط R	5 ملي MgCl₂
متوسط R 0.2	50 ملي مولار هيبس كوه (درجة الحموضة 8.0)
	5 ملي MgCl₂
	0.2 مليون سكروز
متوسط R 0.7	50 ملي مولار هيبس كوه (درجة الحموضة 8.0)
	5 ملي MgCl₂
	0.7 مليون سكروز

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

الشكل 1: عزل ونشاف مناعي للغلويات البروستافية والثايلاكويدات. (أ) عينة تمثيلية من الجلوبول المنقى من Z. mays قبل استخراجها من تدرج السكروز. (ب) عينة ممثلة من الجلوبول الخام من بكتريا النيندينسيس