تحضير مزرعة الحمأة اللاهوائية في ظل ظروف خالية من الأكسجين

الملخص

المصدر: Wagner ، A. O. ، وآخرون ، التحضير المتوسط لزراعة الكائنات الحية الدقيقة في ظل ظروف لاهوائية / خالية من الأكسجين بشكل صارم. J . Vis. Exp. (2019)

يوضح هذا الفيديو تحضير وتطعيم المزارع اللاهوائية باستخدام الحمأة الخالية من الأكسجين في ظل ظروف خاضعة للرقابة الصارمة وغير مؤكسجة.

البروتوكول

تلقيح الوسط

1. تحضير اللقاح من الهضم اللاهوائي.
   1. أضف 400 مل من الماء المقطر إلى قارورة واتركها حتى الغليان.
   2. قم بتبريده (< 30 درجة مئوية) أثناء تنظيف مساحة الرأس بشكل دائم باستخدام N₂.
   3. أضف ما يقرب من 100 غرام من الحمأة المشتقة من جهاز الهضم اللاهوائي.
      ملاحظه: تجنب ملامسة الحمأة المفرطة للأكسجين.
   4. سجل الكتلة الدقيقة للحمأة المضافة للتحديد الدقيق للتخفيف.
   5. استبدل مساحة رأس القارورة ب N₂ وأغلقها بحاجز مطاطي من البوتيل.
   6. رج القارورة لمدة 30 دقيقة عند 120 دورة في الدقيقة.
2. قم بإزالة 5 مل من اللقاح باستخدام حقنة + قنية وحقنها في قوارير المصل المعدة.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
قوارير الثقافة (120 مل ، N20)	Ochs, ألمانيا	102046
حواجز مطاط بوتيل (N20)	Ochs, ألمانيا	102049
أغطية الألومنيوم (N20)	Ochs, ألمانيا	102050
غاز N₂	ميسر ، النمسا		نقاء 5.0
محاقن + قنيات	مختلف
المكشكش	Ochs, ألمانيا	102051
مزيل المكشكش	Ochs, ألمانيا	102052
GC2010	شيمادزو