تحليلات نسيجية ودموية لتقييم تأثيرات العصيا العضلية في الفئران التي تتعرض للإجهاد الحراري

الملخص

المصدر: سوروكولوفا، إ.، وآخرون. الوقاية من الآثار السلبية لإجهاد الحرارة في الفئران بواسطة سلالة البكتيريا الجزئية. J. Vis. Exp. (2016)

يقدم هذا الفيديو تحليلات نسيجية ومجهرية للدم تستخدم لتقييم التأثيرات الوقائية لعصية العصيا السوبتيليس في الفئران المعرضة للإجهاد الحراري.

البروتوكول

1. التحليل الأنسجي

1. إزالة عينات الأمعاء الدقيقة من كل جرذ تجريبي عن طريق إجراء جراحي. تثبيت العينات في مادة تثبيت بوان، ودمها في البارافين، وتحضير مقاطع 6 ميكرومتر، وصبغ أقسام بالهيماتوكسيلين والإيوزين باستخدام الإجراءات القياسية.
2. استخدم نظام مجهر عالي الدقة لقياس ارتفاع زغب الأمعاء وسماكة الغشاء المخاطي الكلي في كل عينة (تكبير 100X). حلل 4 عينات من كل جرذ وقم بإجراء ما لا يقل عن عشرين قياسا في كل عينة. إكسبريس النتائج بالميكرومترات.

2. المجهر الضوئي عالي الدقة للدم

1. استخدم منصة عزل الاهتزاز كقاعدة لنظام المجهر، وكاميرا فيديو وكمبيوتر لتسجيل الصور الحية. معايرة صور الاختبار باستخدام شريحة ريتشاردسون.
2. ضع 7 ميكرولتر من الدم المسحوب حديثا من كل فأر على شريحة زجاجية، غطاء، صور وسجل عشرة إطارات صور بحجم 72 × 53.3 ميكرومتر^مربع في كل عينة (تكبير 1,700X).
3. قياس تركيز الحويصلات باستخدام برنامج يوفر صورا بصرية عالية الدقة مباشرة في الوقت الحقيقي. افحص ما لا يقل عن 20 إطارا للصورة لكل حالة تجريبية.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS)	سيغما-ألدريتش، سانت لويس، ميزوري	P4417
تثبيت بوان	علوم المجهر الإلكتروني، هاتفيلد، بنسلفانيا، الولايات المتحدة الأمريكية	15990
شريحة اختبار ريتشاردسون	علوم المجهر الإلكتروني، هاتفيلد، بنسلفانيا، الولايات المتحدة الأمريكية	80303
كاميرا الفيديو سوني DXC-33	سوني
نظام المجهر الضوئي البصري	شركة سيتو فيفا تكنولوجي، أوبورن، ألاباما
برنامج Image-Pro Plus	ميديا سايبرنيتيكس، ماريلاند، الولايات المتحدة الأمريكية