استخراج البكتيريا المقاومة العضلية باستخدام طريقة ضغط تعتمد على الحقنة

الملخص

المصدر: روفيان، ج. س. وآخرون، تحليل خلية واحدة لتعبير جينات Pseudomonas syringae داخل نسيج النبات. J. Vis. Exp. (2022)

يوضح هذا الفيديو طريقة ضغط تعتمد على الحقنة لاستخراج البكتيريا البلوبلاستية، التي تتكاثر وتشكل مستعمرات دقيقة داخل الأبوبلاست، وهو الفضاء بين الخلايا بين خلايا النبات. تنتج الطريقة عينات بكتيرية خالية من الحطام مناسبة لتحليل الخلايا الأحادية في المراحل النهائية.

البروتوكول

استخراج البكتيريا من الأبوبلاست

1. بعد أربعة أيام من التطعيم، اقطع إما الجزء الجوي من نبات الأرابيدوبسيس أو الورقة الملقحة من نبات الفاصوليا وضعها في حقنة بسعة 20 مل بدون إبرة (الشكل 2G). بالنسبة لأوراق الفاصوليا، لف الورقة على نفسها، مع ترك الوجه السفلي للخارج، كما هو موضح في الشكل 2F.
2. أضف كمية كافية من الماء المقطر لتغطية الأنسجة (عادة 10-15 مل).
3. أدخل المكبس، ومع وضع الحقنة في وضع عمودي مع توجيه الطرف للأعلى، أزل الهواء والفقاعات الهوائية الزائدة داخل الحقنة عن طريق النقر بلطف على السبطانة حتى يصبح كل الهواء قريبا من الطرف. حرك المكبس لإخراج الهواء. بمجرد أن يكون هناك أقل قدر ممكن من الهواء داخل الحقنة، غط طرف فوهة الحقنة بطبقة من البارافين.
4. اضغط على المكبس بحذر لتوليد ضغط إيجابي حتى يصبح النسيج أكثر غموضا (الشكل 1I و الشكل 2H). ثم اسحب المكبس لتوليد ضغط سلبي (الشكل 1J و الشكل 2I). كرر هذه الخطوة 3-5 مرات.
5. قم بإزالة طبقة البارافين والمكبس واجمع السائل الذي يحتوي على البكتيريا المستخرجة من الأبوبلاست، كما في الشكل 2J.

النتائج

الشكل 1: التطعيم البكتيري واستخراج الأبوبلاست باستخدام نباتات الأرابيدوبسيس. (أ) تحضير الوعاء مع تثبيت الشبكة المعدنية بشكل صحيح. (ب) زرع البذور باستخدام عود أسنان...

المواد