عزل الأبواغ الداخلية من عينة بيئية عن طريق التحلل المستهدف للخلايا النباتية

الملخص

المصدر: وندرلين، ت.، وآخرون. العزل الفيزيائي للأبواغ الداخلية عن العينات البيئية من خلال التحلل المستهدف للخلايا النباتية. J. Vis. Exp. (2016)

يوضح هذا الفيديو طريقة لعزل الأبواغ الداخلية من عينة بيئية تحتوي على خلايا نباتية وبكتيريا مختلفة. تتضمن العملية الترشيح، والاضطراب الميكانيكي، والمعالجة الكيميائية الانتقائية لإضعاف وتحليل الخلايا النباتية مع الحفاظ على الأبواغ الداخلية. الخطوة الأخيرة تعزل الأبواغ الداخلية المرنة من خلال ترشيح الغشاء.

البروتوكول

1. تحضير المواد الكيميائية والمعدات

1. اصنع 500 مل من محلول 1٪ من سداسي ميتافوسفات الصوديوم (SHMP) (NaPO₃)_n وتعقيم عن طريق التعقيم (autoclaving).

2. تعقيم مرشحات النيتروسليلوز (NC) (حجم المسامات 0.22 ميكرومتر، القطر 47 مم) عن طريق التداخل داخل أطباق بتري الزجاجية المغلقة.

3. تعقيم مرشحات NC (حجم المسامات 0.22 ميكرومتر، قطر 25 مم) عن طريق التعقيم في أطباق بتري الزجاجية المغلقة.

4. وزن وملاحظة الوزن الفارغ لأنابيب المعقمة 50 مل (مع غطاء) (أنبوب واحد لكل عينة).

5. تحضير مخزن Tris-EDTA (مخزن TE) 1....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
فلاتر غشاء النيتروسليلوز واتمان، حجم مسام 0.2 ميكرومتر، قطر 47 مم	سيغما-ألدرتش	WHA7182004 ألدريتش
تريس(هيدروكسي ميثيل)أمينوميثان	سيغما-ألدرتش	252859 سيغما-ألدرتش	CAS 77-86-1
EDTA	سيغما-ألدرتش	E9884 سيغما-ألدريتش	CAS 60-00-4
الليسوزيم من بياض البيض	سيغما-ألدرتش	62971 فلوكا	بودرة، CAS 12650-88-3
الهوموجينايزر Ultra-Turrax T18 الأساسي	إيكا	3720000
حوامل مرشح زجاجية لأغشية 47 مم، زجاج بايركس	إي إم دي ميليبور	XX10 047 00
مضخة تفريغ كيميائية	ميليبور	WP6122050	220 فولت/50 هرتز
ترشيح أخذ عينات المانيفولد لأغشية 25 مم	ميليبور	مجمع العينات 1225	روبلين
لا أوه	سيغما-ألدرتش	S5881 سيغما-ألدريتش	CAS 1310-73-2
كبريتات الصوديوم الدوديسيل (SDS)	سيغما-ألدرتش	L3771 سيغما
فلاتر غشاء النيتروسليلوز واتمان، حجم مسام 0.2 ميكرومتر، قطر 25 مم	سيغما-ألدرتش	WHA7182002 ألدريتش