مقالة منهجية

توليد مزارع بكتيرية نقية في وسط سائل

نوفمبر 28, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: برومفيلد، ك. د. وآخرون، تقنيات المختبر المستخدمة للحفاظ على وتمييز الأنماط الحيوية للعزلات السريرية والبيئية لمرض فيبريو كوليرا . J. Vis. Exp. (2017)

يوضح هذا الفيديو نمو الثقافات البكتيرية في وسط سائل. الاهتزاز يعزز التهوية ويوزع العناصر الغذائية بشكل متساو، مما يدعم النمو الأسي وينتج عنه تعليق منتظم ونشط أيضيا مناسب للتطبيقات في المراحل اللاحقة.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. صيانة ونمو سلالات Vibrio cholerae

  1. تحضير واستخدام مزارع المرق المجمدة
    1. حبة بسعة 1.8 مل من الزراعة السائلة طوال الليل لمدة دقيقتين عن طريق الطرد المركزي (≥8,600 × جرام) في أنبوب طرد مركزي دقيق معقم بسعة 2 مل، إزالة الفائق، وإعادة تعليق حبيبات الخلية في 900 ميكرولتر من مرق لوريا-بيرتاني (LB) الطازج عن طريق التقطيع.
    2. أضف 900 ميكرولتر من الجليسيرول المعقم بنسبة 60٪ (v/v) إلى الزراعة وامزج عن طريق الدوامة.
    3. انقل الخليط إلى أنبوب تجميد معقم بسعة 2 مل وخزن إلى أجل غير مسمى عند -80 درجة مئوية.
    4. للاستخدام، أزل كمية صغيرة من المرق المجمد باستخدام حلقة تطعيم معقمة وخط للمستعمرات الفردية على ألواح LB Agar. أعد المرق المجمد فورا إلى -80 درجة مئوية بعد الاستخدام لمنع ذوبان الزراعة بالكامل. تحضن صفائح الغطاء على الجانب المنخفض لمدة تتراوح بين 12 إلى 16 ساعة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية.
  2. نمو الزراعة النهارية في الوسط السائل
    1. سلسلة للمستعمرات الفردية (كما هو موضح في القسم 1.1.4) من مخزون مجمد إلى ألواح الأجار LB. تحضن صفائح الغطاء على الجانب المنخفض لمدة تتراوح بين 12 إلى 16 ساعة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية.
    2. قم بتلقيح 4 مل من مرق LB السائل في أنبوب زراعة معقم بسعة 10 مل مع مستعمرة واحدة عن طريق لمس سطح المستعمرة الواحدة بعصا تطبيق معقمة ونقل المستعمرة إلى المرق السائل.
    3. الحضانة مع التهوية في حاضنة هزاز بسرعة 225 دورة في الدقيقة (دورة في الدقيقة) لمدة تتراوح بين 12 إلى 16 ساعة عند 37 درجة مئوية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
60٪ جليسرولكالبيوكيمياء356352http://www.emdmillipore.com/US/en/product/Glycerol%2C-Molecular-Biology-Grade---CAS-56-81-5---Calbiochem,EMD_BIO-356352
اجاربيكتو، ديكنسون وشركاه.214030http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=214030&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D214030%26typeOfSearch%3DproductSearch
HCiفيشر ساينتيفكA144-212تاكل; https://www.fishersci.com/shop/products/hydrochloric-acid-certified-acs-plus-fisher-chemical-10/a144212?searchHijack=true&searchTerm=A144212&searchType=RAPID
لو لوبشركة ديكون لابزMP190-25http://deconlabs.com/products/leloop/
لو ستابشركة ديكون لابزMP186-5http://deconlabs.com/products/lestab/
NaClفيشر ساينتيفكS271-10https://www.fishersci.com/shop/products/sodium-chloride-crystalline-certified-acs-fisher-chemical-6/s27110?searchHijack=true&searchTerm=S27110&searchType=RAPID
أطباق بتري (100 مم × 15 مم)فيشر ساينتيفكFB0875712https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-clear-lid-12/fb0875712#?keyword=FB0875712
التريبتونبيكتو، ديكنسون وشركاه.211705http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=211705&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D211705%26typeOfSearch%3DproductSearch
مستخلص الخميرةبيكتو، ديكنسون وشركاه.212750http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=212750&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D212750%26typeOfSearch%3DproductSearch

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة