توليد مزارع بكتيرية نقية في وسط سائل

الملخص

المصدر: برومفيلد، ك. د. وآخرون، تقنيات المختبر المستخدمة للحفاظ على وتمييز الأنماط الحيوية للعزلات السريرية والبيئية لمرض فيبريو كوليرا . J. Vis. Exp. (2017)

يوضح هذا الفيديو نمو الثقافات البكتيرية في وسط سائل. الاهتزاز يعزز التهوية ويوزع العناصر الغذائية بشكل متساو، مما يدعم النمو الأسي وينتج عنه تعليق منتظم ونشط أيضيا مناسب للتطبيقات في المراحل اللاحقة.

البروتوكول

1. صيانة ونمو سلالات Vibrio cholerae

1. تحضير واستخدام مزارع المرق المجمدة
   1. حبة بسعة 1.8 مل من الزراعة السائلة طوال الليل لمدة دقيقتين عن طريق الطرد المركزي (≥8,600 × جرام) في أنبوب طرد مركزي دقيق معقم بسعة 2 مل، إزالة الفائق، وإعادة تعليق حبيبات الخلية في 900 ميكرولتر من مرق لوريا-بيرتاني (LB) الطازج عن طريق التقطيع.
   2. أضف 900 ميكرولتر من الجليسيرول المعقم بنسبة 60٪ (v/v) إلى الزراعة وامزج عن طريق الدوامة.
   3. انقل الخليط إلى أنبوب تجميد معقم بسعة 2 مل وخزن إلى أجل غير مسمى عند -80 درجة مئوية.
   4. للاستخدام، أزل كمية صغيرة من المرق المجمد باستخدام حلقة تطعيم معقمة وخط للمستعمرات الفردية على ألواح LB Agar. أعد المرق المجمد فورا إلى -80 درجة مئوية بعد الاستخدام لمنع ذوبان الزراعة بالكامل. تحضن صفائح الغطاء على الجانب المنخفض لمدة تتراوح بين 12 إلى 16 ساعة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية.
2. نمو الزراعة النهارية في الوسط السائل
   1. سلسلة للمستعمرات الفردية (كما هو موضح في القسم 1.1.4) من مخزون مجمد إلى ألواح الأجار LB. تحضن صفائح الغطاء على الجانب المنخفض لمدة تتراوح بين 12 إلى 16 ساعة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية.
   2. قم بتلقيح 4 مل من مرق LB السائل في أنبوب زراعة معقم بسعة 10 مل مع مستعمرة واحدة عن طريق لمس سطح المستعمرة الواحدة بعصا تطبيق معقمة ونقل المستعمرة إلى المرق السائل.
   3. الحضانة مع التهوية في حاضنة هزاز بسرعة 225 دورة في الدقيقة (دورة في الدقيقة) لمدة تتراوح بين 12 إلى 16 ساعة عند 37 درجة مئوية.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
60٪ جليسرول	كالبيوكيمياء	356352	http://www.emdmillipore.com/US/en/product/Glycerol%2C-Molecular-Biology-Grade---CAS-56-81-5---Calbiochem,EMD_BIO-356352
اجار	بيكتو، ديكنسون وشركاه.	214030	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=214030&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D214030%26typeOfSearch%3DproductSearch
HCi	فيشر ساينتيفك	A144-212	تاكل; https://www.fishersci.com/shop/products/hydrochloric-acid-certified-acs-plus-fisher-chemical-10/a144212?searchHijack=true&searchTerm=A144212&searchType=RAPID
لو لوب	شركة ديكون لابز	MP190-25	http://deconlabs.com/products/leloop/
لو ستاب	شركة ديكون لابز	MP186-5	http://deconlabs.com/products/lestab/
NaCl	فيشر ساينتيفك	S271-10	https://www.fishersci.com/shop/products/sodium-chloride-crystalline-certified-acs-fisher-chemical-6/s27110?searchHijack=true&searchTerm=S27110&searchType=RAPID
أطباق بتري (100 مم × 15 مم)	فيشر ساينتيفك	FB0875712	https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-clear-lid-12/fb0875712#?keyword=FB0875712
التريبتون	بيكتو، ديكنسون وشركاه.	211705	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=211705&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D211705%26typeOfSearch%3DproductSearch
مستخلص الخميرة	بيكتو، ديكنسون وشركاه.	212750	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=212750&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D212750%26typeOfSearch%3DproductSearch