اختبار الحركة لمقارنة سلالات Vibrio cholerae باستخدام كلوريد Triphenyltetrazolium

الملخص

المصدر: برومفيلد، ك. د. وآخرون. تقنيات مختبرية تستخدم للحفاظ على وتمييز الأنماط الحيوية للفيبريو كوليرا بين العزلات السريرية والبيئية. J. Vis. Exp. (2017)

يظهر هذا الفيديو اختبارا ناعما باستخدام كلوريد ثلاثي فينيل تيترازوليوم لتقييم ومقارنة حركة سلالات فيبريو كوليرا من خلال تصوير النشاط الأيضي من خلال تكوين المنطقة الحمراء حول الخلايا المهاجرة بنشاط.

البروتوكول

1. اختبار الحركة
   1. تحضير مزرعة (أو مزرعات) لسلالات فيبريو كوليرا في مرق LB (لوريا-بيرتاني) السائل.
   2. أضع 1.8 مل من الزراعة الليلا لمدة دقيقتين عن طريق الطرد المركزي (≥8,600 × جرام) في أنبوب طرد مركزي دقيق معقم بسعة 2 مل وإزالة المادة الفائقة باستخدام ماصة. أعد تعليق حبيبات الخلية في محلول ملحي مخزن بالفوسفات بسعة 1.8 مل 1x PBS عن طريق التفريغ.
   3. تكرار عملية الغسل ثلاث مرات، تليها إعادة تعليق نهائية بسعة 1.8 مل و1x PBS.
   4. قم بتطعيم ألواح الأجار الحركية عن طريق إدخال طعنة مطعنة في الثقافة السائلة المغسولة وطعنها عموديا في الوسط. بين كل تلقيح، قم بتعقيم الطعن السلكي باستخدام موقد بنسن، وعند طعن الأجار، تأكد من أن الطعنة المتلقية لا تنحني، لأن ذلك قد يغير النتائج.
   5. تحضن الألواح على الغطاء على الجانب العلوي لمدة 14 إلى 24 ساعة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. بعد 14 ساعة، راقب صفائح الحركة عن كثب لمنع النمو الزائد للزراعة.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
اجار	بيكتو، ديكنسون وشركاه.	214030	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=214030&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3D214030%26typeOfSearch%3DproductSearch
الطرد المركزي على سطح الطاولة	إبندورف	5424	أي جهاز طرد مركزي لأنابيب إيبندورف بحجم 1.5 مل
لو ستاب	شركة ديكون لابز	MP186-5	http://deconlabs.com/products/lestab/
مرق LB (ميلر)	ثيرمو/جيبكو	10855021	لزراعة البكتيريا الثابتة وقياس الجرعة الزائدة
أطباق بتري (150 مم × 15 مم)	فيشر ساينتيفك	FB0875714	https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-clear-lid-12/fb0875714?searchHijack=true&searchTerm=FB0875714&searchType=RAPID
PBS 1x			لزراعة البكتيريا الثابتة وقياس الجرعة الزائدة
كلوريد تريفينيل تيترازوليوم	ألفا إيسار	A10870	https://www.alfa.com/en/catalog/A10870/