اختبار فوغز-بروسكاوير لتمييز الأنواع الحيوية للفيبريو كوليرا

الملخص

المصدر: برومفيلد، ك. د. وآخرون، تقنيات المختبر المستخدمة للحفاظ على وتمييز الأنواع الحيوية للعزلات السريرية والبيئية لمرض فيبريو كوليرا . J. Vis. Exp. (2017).

يوضح هذا الفيديو اختبار فوجيس-بروسكوير (VP) للتمييز بين ثلاثة أنواع حيوية من الكوليرا الفيبريو: الكلاسيكي، النوع البري من إل تور، ونوع إل تور. يتم تلقيح كل مزرعة في وسط يحتوي على الجلوكوز، ويتم حضنها، ومعالجتها ب α-نفثول وهيدروكسيد البوتاسيوم للكشف عن وجود الأسيتوين. يلاحظ لون وردي-أحمر، يشير إلى تفاعل إيجابي في VP، فقط في النوع الحيوي البري، إل تور، مما يميزه عن الأنواع الكلاسيكية والمتغيرة.

البروتوكول

اختبار فوغيس-بروسكاور (VP)

1. حضر الزراعة الحية في مرق LB السائل.
2. قم بتلقيح 4 مل من مرق فوغز-بروسكوير الأحمر الميثيل أو MR-VP، عن طريق حقن 10 ميكرولتر من الزراعة الجاهزة مسبقا خلال الليل في مرق MR-VP بسعة 4 مل في أنبوب زراعة معقم وحضانة التهوية في حاضنة هزاز بسرعة 225 دورة في الدقيقة لمدة 12 إلى 16 ساعة عند 37 درجة مئوية.
3. أضف 150 ميكرولتر من 5٪ (مع النفثول) α و50 ميكرولتر 40٪ (بدون ضخامة) KOH إلى 1 مل من مزرعة MR-VP الليلية في أنابيب الزراعة المعقمة على التوالي.
4. قم بتدوير مؤقت واتركه في درجة حرارة الغرفة لمدة تصل إلى 4 ساعات حتى يظهر تغير اللون.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
MR-VP Broth	ديفكو	216300	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=216300&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3Dmr-vp%2Bmedium%26typeOfSearch%3DproductSearch
كوه	فيشر ساينتيفك	P250-500	https://www.fishersci.com/shop/products/potassium-hydroxide-pellets-certified-acs-fisher-chemical-5/p250500?searchHijack=true&searchTerm=P250500&searchType=RAPID
α-نابثول	MP Biomedicals	204189	http://www.mpbio.com/product.php?pid=05204189