تحليل دقيق وعالي الإنتاجية لنمو البكتيريا باستخدام قارئ الميكروبليت

Abstract

المصدر: كوروكاوا، م.، وآخرون. تحليل دقيق وعالي الإنتاجية لنمو البكتيريا. J. Vis. Exp. (2017)

يوضح هذا الفيديو القياس العالي لنمو البكتيريا باستخدام قارئ الميكروبلايت. يوضح الخطوات المتعلقة بتحضير الزرعة، وقياس الكثافة البصرية، وتحليل ديناميكيات النمو.

Protocol

1. تسجيل النمو في الوقت الحقيقي
   1. ارسم رسم رسم لوحة ب 96 بئر (8 × 12 جدول) لتحديد مواقع عينات الزراعة الملقحة على لوحة 96 بئرا. اطبع الجدول واستخدمه كمرجع للتجربة.
      ملاحظه: يجب أن تحتوي الآبار الموجودة على حواف الصفيحة الصغيرة فقط على وسط فارغ بسبب التبخر.
   2. ضع لوحة ميكرولوح معقمة بسعة 96 بئر مسطحة القاع مع غطاء، P-1000، رؤوس ماصة بسعة 1000 ميكرولتر، P-200، رؤوس ماصة بسعة 200 ميكرولتر، عدة أنابيب دقيقة بسعة 1.5 مل، ماصة متعددة القنوات، خزان كاشف معقم، M63 بدرجة حرارة الغرفة، ومخزون الجلسرون من الإشريكية القولونية على طاولة نظيفة.
   3. أضف حوالي 25 مل M63 إلى خزان الكواشف. استخدم هذا المخزن في جميع الخطوات التالية.
   4. أضف 900 ميكرولتر M63 إلى الأنابيب الدقيقة استعدادا لصنع التخفيف التسلسلي.
   5. قم بإذابة مخزون الجلسرول في درجة حرارة الغرفة. أضف 900 ميكرولتر M63 إلى مخزون الجلسرول المذاب والدوامة. ينتج عن ذلك تخفيفا بنسبة 10 أضعاف لمخزون الجلسرول الأصلي.
   6. نقل 100 ميكرولتر من التخفيف ذو العشرة أطعاف إلى أنبوب دقيق آخر يحتوي على 900 ميكرولتر من M63 ودوامة. ينتج عن ذلك تخفيف بنسبة 100 ضعف.
   7. كرر الخطوة 1.6 حتى يتم تحقيق عدد التخفيفات المطلوب.
   8. املأ الآبار على حافة الصفيحة الصغيرة ب 200 ميكرولتر M63 باستخدام ماصة 8 قنوات (P-200).
      ملاحظه: يمكن استخدام هذه الآبار كبئر فارغة.
   9. حمل 200 ميكرولتر من كل عينة مخففة محضرة في الخطوات 1.4 - 1.7 إلى آبار الميكرولوح وفقا للجدول المرجعي (الخطوة 1.1). قم بتدوير العينات المخففة قبل التحميل وتحميل نفس العينة في عدة آبار في مواقع مختلفة على اللوحة.
   10. ضع الميكرولوح ذو 96 بئر على قارئ اللوحة.
   11. افتح "اقرأ الآن" في "مدير المهام" واختر البرنامج. اضغط على "موافق" لبدء القياس. احفظ التسجيل كملف تجريبي جديد لتحليل البيانات.

Materials