استخراج الحمض النووي الجينومي القائم على التحلل الحراري من بكتيريا ممرضة

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: جولا، س. وآخرون. تحليل متكرر متعدد المواقع متعدد الأرقام المتغيرة لبكتيريا يرسينيا روكيري الممرضة للأسماك بواسطة PCR متعدد القنوات والرحلان الكهربائي الشعري. J. Vis. Exp. (2019).

يستخرج هذا البروتوكول الحمض النووي الجينومي من يرسينيا روكيري عن طريق تعليق مستعمرات معزولة في مياه فائقة النقاء وتطبيق الحرارة لتحليل الخلايا. يفصل الطرد المركزي المادة الفائقة التي تحتوي على الحمض النووي عن حطام الخلية، مما ينتج نموذجا للحمض النووي المناسب للنمذجة الجينية المعتمدة على PCR والتحليل الوبائي.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. زراعة واستخراج الحمض النووي الجيني للبكتيريا

ازرع مزارع Y. ruckeri النقية على أي نوع أجار مناسب (استخدم المؤلفون 5٪ من أجار دم البقر) وحضن عند 22 درجة مئوية لمدة يوم-يومين، أو 15 درجة مئوية لمدة 3-4 أيام.
من كل صفيحة أجار، اختر مستعمرة تمثيلية واحدة مع حلقة تلقيح وانقل إلى أنابيب طرد مركزي بسعة 1.5 مل تحتوي على 50 ميكرولتر من الماء فائق التنقية. تعليق، ودوامة لفترة وجيزة، واحتضن لمدة 7 دقائق على كتلة تسخين عند 100 درجة مئوية.
قم بالطرد المركزي بقوة 16,000 × جرام لمدة 3 دقائق واستخدام ماصة لنقل المادة الفائقة بعناية إلى أنبوب طرد مركزي فارغ بسعة 1.5 مل. انتقل إلى الخطوة التالية باستخدام المادة الفائقة كقالب للحمض النووي أو تخزينه عند -20 درجة مئوية حتى ذلك الوقت.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
حاضنة 22°C/15°C	حسب الفضل.	NA
أجهزة الطرد المركزي	حسب الفضل.	NA
أنابيب القفل الآمن من إيبندورف، 1.5 مل	إبندورف	30120086	أنابيب الطرد المركزي المستخدمة أثناء استخراج الحمض النووي.
الثلاجه	حسب الفضل.	NA
كتلة التدفئة	حسب الفضل.	NA
ماء ميلي-كيو	NA	NA	الماء المنقى المستخدم أثناء PCR والرحلان الكهربائي الشعري. الوصفة القياسية؛ تم إنتاجه داخليا.
الثقافة النقية ليرسينيا روكيري	NA	NA	مثلا الكريوبريدور المحجوز أو الطازج.
فورتكسر	حسب الفضل.	NA

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن