تعريض مجتمع بكتيريا فموية صناعي لمراحل هضم محاكاة

الملخص

المصدر: أرويو، م. س.، وآخرون. تقييم جدوى اتحاد بكتيريا صناعي على واجهة المضيف والميكروب في المختبر . J. Vis. Exp. (2018)

يوضح هذا الفيديو تقييم قابلية حياة مجتمع ميكروبي فموي صناعي أثناء الهضم الفموي والمعدة والأمعاء المحاكاة. يتم قياس بقاء البكتيريا بعد كل مرحلة، مما يكشف عن تراجع تدريجي بسبب الإجهاد الهضمي.

البروتوكول

1. البقاء على قيد الحياة البكتيرية بعد ظروف العبور المجهيية المعوية

ملاحظه: حضر سوائل هضم محاكاة مع التعديلات الموضحة أدناه. جهز جميع التخفيفات بالماء فائق النقي. تعقيم جميع المحاليل بالفلتر عبر مرشح بحجم 0.22 ميكرومتر ونفذ عملية الهضم في ظروف معقمة.

1. الهضم الفموي:
   1. ضع 3 مل من مجتمع البكتيريا في أنبوب معقم بحجم 50 مل، وامزجه مع 3 مل من سائل اللعاب المحاكى (SSF)، الذي يحتوي على الميليمول لكل لتر (mmol L⁻¹): كلوريد البوتاسيوم (KCl)، 15.1؛ فوسفات أحادي البوتاسيوم (KH₂PO₄)، 3.7؛ بيكربونات الصوديوم (NaHCO₃)، 6.8؛ سداسي هيدراتات كلوريد المغنيسيوم (MgCl₷6H₂O)، 0.5، كربونات الأمونيوم [(NH₄)₂CO₃]، 0.06؛ حمض الهيدروكلوريك (HCl)، 1.1؛ ديهيدرات كلوريد الكالسيوم (CaCl₂·2H₂O)، 0.75. أضف 75 وحدة U/ml من α-الأميلاز من لعاب الإنسان من النوع IX-A و2 جم/لتر من المخاط من معدة الخنزير (النوع الثاني) إلى SSF.
   2. حضن الخليط لمدة دقيقتين عند 37 درجة مئوية و100 دورة في الدقيقة. اجمع عينة بحجم 2 مل لاستخراج الحمض النووي وقياس التدفق الخلوي (S1).

2. الهضم المعدي:

1. أضف 4 مل من السائل المعدة المحاكى (SGF)، الذي يحتوي على (بوحدة mmol L-1): KCl، 6.9؛ KH₂PO₄، 0.9; NaHCO₃، 25؛ كلوريد الصوديوم (NaCl)، 47.2؛ MgCl₂·6H₂O، 0.1، (NH₄)₂CO₃، 0.5؛ HCi، 15.6؛ CaCl₂·2H₂O، 0.075. بالإضافة إلى ذلك، احتوى SGF على 2 جرام/لتر من الموسين من معدة الخنزير (النوع الثاني).
2. قس الرقم الهيدروجيني واضبط إلى pH 3 مع 1 مولر (1 M) HCl إذا لزم الأمر. حضن عند 37 درجة مئوية و100 دورة في الدقيقة. اجمع عينة بحجم 2 مل (S2).

3. الهضم في الأمعاء الدقيقة:

1. أضف 4 مل من سائل الأمعاء المحاكى (SIF) الذي يحتوي على (بوحدة mmol L-1): KCl، 6.8؛ KH₂PO₄، 0.8; NaHCO₃، 85; NaCl، 38.4؛ MgCl₂·6H₂O، 0.33; HCi، 8.4؛ CaCl₂·2H₂O، 0.3، إلى أنبوب الهضم.
2. قم بتعديل الرقم الهيدروجيني إلى 7 مع 1 مولار من هيدروكسيد الصوديوم (NaOH) إذا لزم الأمر. حضن عند 37 درجة مئوية و100 دورة في الدقيقة. اجمع عينة بحجم 2 مل (S3).

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
المخاطين من معدة الخنزير من النوع الثاني	سيغما-ألدرتش	M2378
برنامج تلفزيوني	جيبكو	14190250
ميليبور ميلي-كيو الأكاديمي، نظام مياه فائقة النقاء	ميليبور، ميرك KGaA	-
هزاز الحاضنة InnOva 4080	نيو برونزويك العلمي	8261-30-1007
مياه خالية من النوكلياز	الرحلان الكهربائي السيرفي	28539010
مقياس تدفق BD Accuri C6	بكالوريوس العلوم الحيوية	653118
مجموعة InnuPREP PCRpure	أناليتيك ينا	845-KS-5010250	مجموعة تنقية PCR