الإثراء الانتقائي والعزل للبكتيريا البحرية المتحللة للنفط من عينات مياه البحر

الملخص

المصدر: فيليلا، ه. د. م. وآخرون. البحث عن السلالات الميكروبية للمعالجة الحيوية وتطوير البروبيوتيك لأبحاث وحفظ الكائنات الميتا. J. Vis. Exp. (2019)

يوضح هذا الفيديو العزل الانتقائي للبكتيريا البحرية المتحللة للنفط من خلال تخصيب عينات مياه البحر على وسائط قائمة على النفط، مما يمكن من استعادة السلالات النقية التي يمكن استخدامها في معالجة النفط الخام البيولوجية وتنظيف البيئة.

البروتوكول

1. جمع وتخزين المياه والشعاب المرجانية لعزل الميكروبات

ملاحظه: من الضروري أخذ إحداثيات ودرجة حرارة مواقع أخذ العينات. إذا أمكن، يمكن أن تساعد البيانات الوصفية مثل الملوحة، الرقم الهيدروجيني، العمق، وشدة الضوء أيضا في إيجاد طرق زراعة مضبوطة وتفسير البيانات في المستقبل. للحصول على نتائج موثوقة، احتفظ بالعينات مخزنة لأدنى مدة ممكنة. قد تتغير ميكروبيومات الماء والشعاب المرجانية بشكل كبير إذا لم تحفظ العينات عند درجة الحرارة المناسبة و/أو تم تخزينها لفترات طويلة. إذا لم تتم خطوة العزل فور الجمع، فمن الضروري الحفاظ على العينات عند 4 درجات مئوية حتى المعالجة. كلما طالت مدة تخزين العينات، حتى عند 4 درجات مئوية، زاد تغير مجتمع الميكروبات.

1. خذ عينات....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
زجاجة تخزين وسائط PYREX بسعة 500 مل	توماس ساينتفيك/كورنينغ	1743E20/1395-500	تستخدم لتذوق الماء.
زجاجات شفط بسعة 500 مل	توماس ساينتفيك/كورنينغ	1234B28/1220-2X	يستخدم لفصل كسور الزيت.
كماشة قاطعة سلكية بقياس 6 إنش	توماس ساينتفيك/ريستيك	1173Y64/23033	يستخدم لقطع شظايا المرجان.
اجار	هيميديا	PCT0901-1 كجم	كان يستخدم لصنع وسائط صلبة.
مرق بوشنيل هاس	هيميديا	M350-500G	يستخدم كوسط أدنى ليتم تعزيزه بمصادر الكربون.
قارورة إيرلنماير	توماس ساينتفيك/DWK علوم الحياة (كيمبل)	4882H35/26500-125	يستخدم لزراعة النقع المرجاني باستخدام خرز زجاجي.
غطاء التدفق الطبقي			كان بحاجة للعمل في ظروف معقمة.
لوريا بيرتاني برق، ميلر (شورق ميلر لوريا بيرتاني)	هيميديا	M1245-1KG	يستخدم كوسيط غني لزراعة البكتيريا.
مارين آجار 2216 (زوبيل مارين آغار)	هيميديا	M384-500G	يستخدم كوسيط غني لزراعة البكتيريا.
حاضنة الهزاز المداري			يستخدم لاحتضان الوسائط السائلة والزيت.
حاضنة الألواح			تستخدم لحضانة الأطباق.
هاون ومدقة من الخزف	توماس العلمي/شركة يونايتد ساينتيفيك سبلايزز	1201U69/JMD150	يستخدم لنقع شظايا المرجان.
الطرد المركزي المبرد			اعتدت على الطرد المركزي لزراعة البكتيريا.
مقياس الطيف الفوتوني			يستخدم لقياس الكثافة البصرية لمزارع البكتيريا.
مجموعة تنقية الحمض النووي الجينومية من ويزارد	بروميغا	A1120	يستخدم لاستخراج الحمض النووي من السلالات الميكروبية.