المراقبة المستمرة للضوضاء البيولوجية في البكتيريا باستخدام المجهر الزمني

الملخص

المصدر: تشايموفيتز، إ. أ.، وآخرون. القياس المستمر للضوضاء البيولوجية في الإشريكية القولونية باستخدام المجهر المؤقت السري. J. Vis. Exp. (2021)

يوضح هذا الفيديو التصوير الفوري للضوضاء البيولوجية في الإشريكية القولونية من خلال تتبع تقلبات فلورة GFP أثناء نمو وانقسام البكتيريا باستخدام المجهر الزمني الفاصل.

البروتوكول

1. تحضير العينة للتصوير المجهري
   1. أزل القارورة من حمام الماء. امسح الجزء الخارجي من القارورة واتركه يبرد حتى درجة حرارة الغرفة (25 درجة مئوية).
      ملاحظه: أزل القارورة قبل انتهاء المؤقت بحوالي 3 دقائق.
   2. صب 3 مل من الجل باستمرار إلى محيط الصفيحة بحركة دائرية. اتركه ليتصلب لبضع دقائق.
   3. أغلق الألواح بشريط لاصق واثقب عدة فتحات بإبرة 25 جيلون. اقلب جميع الصحون لمنع تكثف الماء من التقطير على الهل.
   4. حضن جميع الأطباق على حرارة 4 درجات مئوية لمدة 30 دقيقة للسماح بالتصلب الكامل مع منع انقسام الخلية.
      ملاحظه: اترك العينات عند 4 درجات مئوية للقياسات المتتالية، لا يزيد عن يوم واحد.
   5. شغل المجهر حسب تعليمات الشركة المصنعة.
   6. ابحث عن التركيز الأولي باستخدام عدسة تضخيم منخفضة وشغل نظام التركيز التلقائي (AFS).
   7. استخدم الزيت إذا لزم الأمر، أغمر العدسة بالزيت وافتحها بحذر بتحريك اللوحة باستخدام وحدة تحكم المنصة (وليس يدويا)، ويمكن تفعيل نظام AFS مرة أخرى.
   8. استخدم المقطع العرضي النسبي في اتجاه Z، متبعا الاقتراح الافتراضي لمقطع الخطوط Z بالخطوة.
      ملاحظه: التقط صورا ساطعة كل 5 دقائق وصور فلورية كل 20 دقيقة. أحيانا يحتاج التركيز إلى تعديل خلال أول 30 دقيقة. تسخين صندوق حاضنة المجهر والزيت، أثناء تبريد العينة، يساعد عادة في تقليل فقدان التركيز الأولي.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
طبق زجاجي 35 مم	ماتيك	P35G-0.170-14-C	السماكة تتوافق مع عدسة المجهر.
أغاروز	لونزا	5004	تحضير لاعب الوسط
إكليبس تي	نيكون		المجهر المقلوب
إيمرسول 518F	زييس	4449600000000	زيت الغمر
شريط بارافيلم	بيميس	PM-996	يشار إليه في النص باسم شريط