Method Article

نمذجة البلعمة المملة باستخدام خلايا الدم الحمراء المظلمة في المختبر

January 30th, 2026

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: ناغري، ن. وآخرون. بلعمة الخلايا البلعمية الحويخية وإزالة البكتيريا في الفئران. J. Vis. Exp. (2019).

يوضح هذا الفيديو تقييم البلعمة التي توسطها مستقبلات المكملات باستخدام خلايا دم حمراء للأغنام مجهزة ب IgM والمكملة، تليها امتصاصها بواسطة بلاعم الفئران. يتم قياس مدى البلعمة من خلال قياس ناتج كروموجيني أزرق يتكون من أكسدة ديامينوفلورين المحفز بالهيموغلوبين.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. البلعمة التي تعبر عن FCΓR وCR

  1. لعملية الحقن الجراحي، حضن 2 ×10 8 خلايا دم حمراء للأغنام (SRBCs) مع 50 ميكرولتر من مضاد SRBC-IgM للأرنب أو 50 ميكرولتر من مضاد SRBC-IgG للأرنب لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  2. حضن خلايا الدم البيضاء المجهولة IgM مع 50 ميكرولتر من مصل الإنسان الناقص C5 (C5D) لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية لتثبيت شظايا المكمل C3b وC3bi على SRBCs المطلية ب IgM.
  3. الخلايا البلعمية البذرية (MH-S) (10,000 خلية/بئر) في صفيحة تحتوي على 96 بئرا وتحتضن طوال الليل للحصول على التقاء ~70٪. أضف 100 ميكرولتر من 1 × 10 أقراص SRBC أوبسونية بحجم7/مل إلى كل بئر من خلايا MH-S وحضن لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية. غسل SRBCs غير المرتبطة بسرعة كبيرة (~1 دقيقة) ب 100 ميكرولتر من محلول تحلل كلوريد الأمونيوم-البوتاسيوم (ACK).
  4. قم بتحليل الخلايا التي تحتوي على 0.1٪ SDS وإضافة 50 ميكرولتر من 2,7-ديامينوفلورين (DAF) يحتوي على 3٪ بيروكسيد الهيدروجين و6 مولار يوريا. قس امتصاص تكوين الفلورين الأزرق المحفز بالهيموغلوبين عند 620 نانومتر.
  5. تحديد عدد SRBCs باستخدام منحنى قياسي عند قيم امتصاص 620 نانومتر مع عدد معروف من SRBCs. وبالمثل، يتم معالجة خلايا MH-S التي تم حضانها بخلايا SRBC غير أوبسونية لاستخدامها كضوابط سالبة.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
2,7-ديامينوفلورين (DAF)سيغما-ألدرتشD17106درجة علم الأحياء الجزيئي
70٪ إيثانولشركة ديكون لابز18C27Bالدرجة التحليلية
صفيحة ذات 96 بئركورنينغ3603درجة علم الأحياء الخلوي
مخزن تحليل ACKتقنيات الحياةA10492درجة علم الأحياء الجزيئي
مصل ناقص في C5سيغما-ألدرتشC1163كاشف كيميائي حيوي
الطرد المركزيلابنت إنترناشونالC0160-R 
جهاز الطرد المركزي الخلوي السيتوسبين 4ثيرموفيشر ساينتيفيكA78300101 العدد 11 
وسائط DMEM لثقافة الخلاياجيبكو11995-065درجة علم الأحياء الخلوي
FBSأتلانتا بيولوجيالزS11550درجة علم الأحياء الخلوي
مقياس التدفق الخلويبكالوريوس العلوم الحيويةFACSCalibur 
فلو جو سوفتويرفلوجو، ذ.م.م  
الملقطدومون0508-SS/45-PS-1مناسب لتشريح المختبرية
طبق زجاجي قاعشركة ماتيكP35G-0.170-14-Cدرجة علم الأحياء الخلوي
الحقنة عالية الضغطبن سينشريFMJ-250مناسب للاستخدام في المخبرية
الهومونينازرأومني إنترناشونالTH-01 
بيروكسيد الهيدروجينسيغما-ألدرتشH1009الدرجة التحليلية
المجهر الفلوري المقلوبأوليمبوسIX73 
جهاز الرش الدقيقبن سينشريIA-1Cمناسب للاستخدام في المخبرية
بارافورمالديهايدسيغما-ألدرتشP6148درجة الكواشف
PBSجيبكو20012-027درجة علم الأحياء الخلوي
الأرنب المضاد ل SRBC-IgGMP Biomedicals55806مناسب للاختبارات المناعية
الأرنب المناهض ل SRBC-IgMمختبرات سيدارلينCL9000-Mمناسب للاختبارات المناعية
المقصميلتكس5-2مناسب لتشريح المختبرية
خلايا الدم الحمراء للأغنام (SRBCs)MP Biomedicals55876الناقلات المغسولة والمحفوظة

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Complement Mediated PhagocytosisOpsonized Red Blood CellsC3bi DepositionMacrophage Phagocytosis AssayHemoglobin Catalyzed OxidationDiaminofluorene DetectionAmmonium Chloride LysisSodium Dodecyl SulfateSpectrophotometer AbsorbanceStandard Curve Quantification

Related Articles