تصوير مواقع البكتيريا وتفاعل المضيف في أنسجة الرئة البشرية

Abstract

المصدر: ميلز، ب. وآخرون، الفحص البصري لمجسات بكتيرية جديدة على أنسجة الرئة البشرية خارج الجسم الحي بواسطة المجهر الليزري الكونفوكلي. J. Vis. Exp. (2017)

يعرض هذا الفيديو تصويرا فوريا لمكورات العنقود الذهبية الموسومة بالفلورية في التعليق وأنسجة الرئة باستخدام مجهر فلوري الألياف الكونفوكية.

Protocol

1. جمع البيانات باستخدام المجهر الليزري الكونفوكال (CLE)
   1. بعد الإعداد، ستفتح نافذة لاختيار موقع التخزين وبادئة الملف. اختر المجلد المطلوب لتخزين البيانات، وسم البادئة وفقا لذلك.
   2. ضع دواسات القدم بحيث يمكن للمشغل الوصول إليها بسهولة. دواسة اليسار: تشغيل وإيقاف الليزر (الليزر)؛ دواسة الوسط: توقف؛ الدواسة اليمنى: تسجيل/إيقاف.
      ملاحظة: يمكن أيضا الوصول إلى تحكمات الليزر من خلال عناصر التحكم على الشاشة.
   3. اضغط على 'تشغيل' على الشاشة أو اضغط على دواسة القدم اليسرى لتشغيل الليزر. سيبدأ ذلك في التقاط الصور والحصول عليها باستخدام قوة ليزر 100٪ ومعدل إطارات 12 إطار/ثانية (الإعدادات الافتراضية).
      ملاحظة: بالنسبة لتطبيقات أخرى، يمكن تعديل هذه الإعدادات على الشاشة إذا لزم الأمر، حسب نوع العينة.
   4. صور كل عينة من التعليق البكتيري.
      1. أدخل الطرف البعيد من الألياف التصويرية للتصوير في المجهر الفلوري الكونفوكالي (FCFM) وحرك الألياف ببطء عبر التعليق لفحص العينة.
      2. سجل مقاطع الفيديو بأي طول (حتى 10 دقائق) بالضغط على دواسة القدم اليمنى أو اختيار أدوات التحكم على الشاشة، بينما تتحرك الألياف ببطء حول العينة.
      3. نظف الطرف البعيد من ألياف تصوير FCFM ب 8٪H2_{O و2} O وأنسجة تنظيف العدسات بين العينات. ​
         ملاحظة: أطوال الفيديو النموذجية التي تتراوح بين 10-30 ثانية كافية للتصوير الصناعي .
   5. صور كل عينة من أنسجة الرئة.
      1. أدخل الطرف البعيد من ألياف تصوير FCFM في العينة، لضمان التلامس المباشر بين نهاية الألياف والنسيج. حرك طرف ألياف التصوير بلطف لفحص العينة.
         ملاحظة: رفع نهاية الألياف بعيدا عن النسيج سيزيل النسيج من المستوى البؤري؛ ومع ذلك، قد يستخدم هذا لتصوير البكتيريا الموسومة التي لا تلتصق بالنسيج.
      2. سجل مقاطع الفيديو بأي طول (حتى 10 دقائق) بالضغط على دواسة القدم اليمنى أو اختيار أدوات التحكم على الشاشة، بينما تتحرك الألياف ببطء حول العينة.
         ملاحظة: عادة، تكون أطوال الفيديو 30 ثانية كافية للتصوير خارج الجسم على الأنسجة.
      3. نظف الطرف البعيد لألياف تصوير FCFM باستخدام أنسجة تنظيف العدسات و8٪ H_{2O 2} بين العينات.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1-14 ميكروفوج	SciQuip	90616	جهاز الطرد المركزي الدقيق الصغير على سطح الطاولة
صفيحة ذات 96 بئر	كورنينغ	3370	لوحة الفحص
كالسين AM	سيغما ألدريتش	17783	صبغة فلورية تجارية
سيلفيزيو 488 نانومتر بحثي CLE	ماونا كيا تكنولوجيز	LC-0001-488	جهاز المجهر الليزري الكونفوكال
كليتوب-إس	كليتوب	14110601	منظف الألياف
إبندورف (1.5 مل)	إبندورف	30120086	أنبوب ميكروفوج بسعة 1.5 مل
محلول ملحي مخزن لفوسفات جيبكو	ثيرمو فيشر العلمي	10010023	PBS - وسائط الغسل
IC-Viewer	ماونا كيا تكنولوجيز	LW-0001	برنامج جمع ومعالجة البيانات لنظام سيلفيزيو البحثي 488 نانومتر
أبحاث غير قياسية AlveoFlex بسرعة 488 نانومتر	ماونا كيا تكنولوجيز	MP-0002-AF3	ألياف المجهر الفلورية الكونفوضية الليفية
مجموعة كوانتي 488 نانومتر	ماونا كيا تكنولوجيز	LQ-0005	مجموعة معايرة لنظام CellVizio 488
S. aureus ATCC 25923	ATCC	25923	السلالة البكتيرية المستخدمة في هذه الدراسة
كوفيت التصوير الطيفي شبه الدقيق	سيغما ألدريتش	C5416-100EA	بالنسبة للقياس الطيفي
راحة خلط الحرارة	إبندورف	41102422	سخان على سطح الطاولة مع هز