التنظيف الانتقائي لديدان التهاب القيعان الهندي لتثبيط ميكروبيوم الأمعاء

الملخص

المصدر: مورغان، إي. وآخرون. التنظيف الانتقائي لديدان التهاب القيرغ البرية لإثراء بكتيريا ميكروبيوم الأمعاء. J. Vis. Exp. (2021)

يوضح هذا الفيديو بروتوكولا لعزل البكتيريا المعوية محل الاهتمام من ديدان التهاب القيران البري. يتم أولا تجويع الديدان وغسلها للقضاء على البكتيريا المتبقية من سطحها وأمعاءها مع الحفاظ على الميكروبات المستهدفة. بعد تنظيف السطح وخطوات الزحف المتعددة، يتم تشريح الديدان لاستخراج الأمعاء التي تحتوي على البكتيريا المعنية، والتي تجمع ثم تجمد للتخزين.

البروتوكول

1. تشريح الأمعاء وتحديد الأنواع الميكروبية باستخدام PCR

1. زراعة على حرارة 20 درجة مئوية لمدة 3-4 أيام للسماح لها بالجوع وتقليل كمية بكتيريا OP50-1 (سلالة الإشريكية القولونية OP50-1). أضف 5 مل من وسط M9 إلى صفيحة الديدان الجائعة.

2. باستخدام ماصة ومصباح زجاجي معقم، قم بإزالة الماصة على ديدان M9+ من اللوح ونقلها إلى أنبوب طرد مركزي معقم بسعة 15 مل.

3. باستخدام جهاز طرد مركزي سريري، قم بتدوير الديدان في الأنبوب بقوة 1000 x g لمدة 30 ثانية في درجة حرارة الغرفة.

4. باستخدام ماصة معقمة بسعة 15 مل، أزل المادة الفائقة من أنبوب الطرد المركزي دون إ....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
أغاروز	فيشر ساينتيفك	BP1356
10٪ SDS	إنفيتروجين	AM9822
إبرة BD PrecisionGlide - 26 G	فيشر ساينتيفك	305115
KH₂PO₄	فيشر ساينتيفك	P-286
NaCl	فيشر ساينتيفك	S-671
NH₄Cl	فيشر ساينتيفك	A-661
الستربتوميسين	ميليبور-سيغما	S6501-50G
تتراسيكلين	ميليبور-سيغما	T7660-5G
ترايتون X-100	فيشر ساينتيفك	BP-151
نظارات الساعة	VWR	470144-850