يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

اكتشاف التعبير الجيني المستهدف في دماغ فأر مصاب بالبكتيريا

301 مشاهدة

فبراير 2, 2026

في هذه المقالة

الملخص

المصدر: تشانغ، س.، وآخرون. مسار العدوى داخل الجمجمة تحت الشفيق لدراسة أدوار أغشية المكورات العقدية السويس في التهاب السحايا في نموذج عدوى الفأر. J. Vis. Exp. (2018).

يوضح هذا الفيديو كيفية اكتشاف تعبير الجين المستهدف في دماغ فأر مصاب بالبكتيريا. يتم استخراج الحمض النووي الريبي، ومعالجته بإنزيم يحلل الحمض النووي، ثم ينسخ إلى cDNA. يتم تضخيم الحمض النووي القائم على الحمض النووي من خلال الدورة الحرارية باستخدام بادئات جينية محددة، بينما يرتبط صبغة مرتبطة بالحمض النووي المضخم، مما يصدر فلورة. يتم تحليل إشارات التألق لتأكيد وجود الجين المستهدف.

البروتوكول

1. تحضير البكتيريا

ملاحظة: تم عزل السلالة الشديدة النمط الثاني من Streptococcus suis (S. suis) من خنزير مريض يعاني من التهاب السحايا. تم زراعة السلالة P1/7 في مرق تود-هيويت (THB، تركيبة لكل لتر من THB: تسريب القلب، 3.1 جرام؛ نيوبتون 20.0 جرام؛ ديكستروز 2.0 جم؛ كلوريد الصوديوم 2.0 جرام؛ فوسفات الصوديوم 0.4 جرام؛ كربونات الصوديوم 2.5 جرام) وتم تغطيتها على أغار تود-هيويت (THA، الصيغة لكل لتر من THA: تسريب القلب، 3.1 جرام؛ نيوبتون 20.0 جرام؛ ديكستروز 2.0 جرام؛ كلوريد الصوديوم، 2.0 جم؛ فوسفات الصوديوم، 0.4 جرام؛ كربونات الصوديوم، 2.5 جرام؛ أغار، 15.0 جرام) عند 37 درجة مئوية و5٪ ثاني أكسيد الكربون2.

  1. مجموعة خلايا العوال....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
مرق تود هيويت (THB)بيكتون، ديكنسون وشركاهDF0492078قم بإذابة 30 جرام من المسحوق في 1 لتر من الماء المنقي. جهاز تعقيم على 121° لمدة 15 دقيقة.
أغارDSBIO16C0050قم بإذابة 15 جرام من المسحوق في 1 لتر من THB. جهاز تعقيم على 121° لمدة 15 دقيقة.
نظام تنقية المياه المرجعي ميلي-كيوميرك KGaAZ00QSVCUSبدون Dnase/ Rnase
NaClشركة تيانجين كيميو للكاشف الكيميائي المحدودة10019318 
Na₂HPO₄شركة شيلونغ العلمية المحدودة9009012-01-09 
KClشركة شيلونغ العلمية المحدودة9009017-01-09 
KH₂PO₄شركة شيلونغ العلمية المحدودة9009019-01-09 
KOHشركة شيلونغ العلمية المحدودة9009014-01-09 
الجلسرولشركة سيونفارم للكاشف الكيميائي المحدودة10010618مخفف بنفس حجم الماء المنقي، ويستخدم المعقم عند 121° لمدة 15 دقيقة
4٪ بارافورمالديهيدشركة سيونفارم للكاشف الكيميائي المحدودة80096675 
25٪ جلوتارالديهيدشركة سيونفارم للكاشف الكيميائي المحدودة30092436مخفف بمقدار 10 مرات بماء منقى للتثبيت.
الإيثانولشركة سيونفارم للكاشف الكيميائي المحدودة10009218 
الكلوروفورمشركة سيونفارم للكاشف الكيميائي المحدودة10006818 
سبكتروفوتومترشركة دي نوفيكسDS-11+ 
سحق الخلايا بالموجات فوق الصوتيةشركة نينغبو ساينتز للتكنولوجيا الحيوية المحدودةJY96-IIN 
الطرد المركزيشركة هيتاشي كوكي المحدودةCT15RE 
الثلاجةشركة أوكما المحدودةDW-86L500 
مجموعة FastRNA Pro GreenMP Biomedicals#6045-050 
جهاز فاست بريب-24MP Biomedicals116005500 
أداة لجهاز PCRشركة سينسو كويست GmbH1124310110 
كوانتستوديو 6 فليكسثيرمو فيشر العلمي4485689 
SYBR بريمكس إكس تاك IIشركة تاكارا للتكنولوجيا الطبية الحيوية (بكين) المحدودةRR820A 
مجموعة كاشف RT من PrimeScript مع ممحاة gDNAشركة تاكارا للتكنولوجيا الطبية الحيوية (بكين) المحدودةRR047A 

الوسوم

RNA cDNA Quantitative Real Time PCR DNA