قياس كمية تساقط البكتيريا لتقييم إمكانية انتقال العدوى في ذبابة الفاكهة

الملخص

المصدر: سيفا-جوثي، ج. أ. وآخرون، العدوى البكتيرية الفموية والتساقط في ذبابة الفاكهة الميلانوغاستر. J. Vis. Exp. (2018)

يوضح هذا الفيديو إجراء مراقبة تساقط البكتيريا في ذبابة الفاكهة عن طريق نقل ذبابة مصابة عبر عدة أنابيب تحتوي على غذاء، واستعادة البكتيريا المتساقطة، وقياس المستعمرات القابلة للحياة من خلال التخفيف والتلوين المتسلسل.

البروتوكول

1. قياس تساقط البكتيريا
   1. قس التساقط بجانب الحمل الداخلي.
   2. بعد العدوى، نقل الذبابة الفردية إلى أنابيب طرد مركزي دقيق بسعة 1.5 مل تحتوي على ~50 ميكرولتر من وسط لويس لمدة 24 ساعة.
   3. قم بإزالة الذباب لقياس الحمل الداخلي وغسل الأنابيب ب 100 ميكرولتر من محلول ملحي مخزن بالفوسفات (1x PBS) عن طريق الدوامة الكثيفة لمدة 3 ثوان.
   4. قس وحدات تكوين المستعمرات (CFUs) في هذا الغسيل عن طريق الطلاء على أجار المغذي LB (لوريا-بيرتاني).
   5. بعد العدوى، نقل الذبابة الفردية إلى أنابيب طرد مركزي دقيق بسعة 1.5 مل تحتوي على ~50 ميكرولتر من وسط لويس لمدة 24 ساعة.
   6. نقل الذباب إلى أنابيب طرد مركزي دقيقة جديدة تحتوي على ~50 ميكرولتر من وسط لويس لمدة 24 ساعة إضافية. اغسل الأنابيب الملوثة ب 100 ميكرولتر من 1x PBS عن طريق الدوامة الكثيفة لمدة 3 ثوان.
   7. قس الوحدات الخالية من الألياف في هذا الغسيل عن طريق الطلاء على أجار المغذيات LB.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
القوارير	سارستيدت المحدودة	58.49	أنبوب قاعدة بوليسترين مسطحة 75مم × 23.5 ملم، 23 مل
أغار	سيغما-ألدرتش	A7002	آغار، الرماد 2.0-4.5٪
السكر البني	بيدفيست	66032	سكر بني فاتح وناعم
الذرة	مزرعة دوف		دقيق الذرة العضوية
خميرة فيرميبان	بيدفيست	96360	خميرة جافة وسريعة
أطباق بترى	شركة فيشر العلمية البريطانية المحدودة	15788517	صحن بترى X600 بحجم 90 × 16.2مم فتحة تهوية ثلاثية معقمة
أنبوب إيبندورف (1.5 مل)	سارستيدت المحدودة	72.690.001	أنبوب سارستيدت ميكرو تيوب مخروطي غطاء دفع 1.5 مل ستاندرد نيوترال
الإيثانول	شركة VWR الدولية المحدودة	20821.33	ETHANOL ABSOLUTE ANALAR NP ACS/R.PE - درجة تحليلية
مرق LB، ميلر	شركة فيشر العلمية البريطانية المحدودة	BP1426	يحتوي على 10 جرام من التريبتون، 5 جرام مستخلص الخميرة، 10 جرام كلوريد الصوديوم لكل لتر
صفيحة دقيقة ببئر 96	شركة مستلزمات المختبر العلمي المحدودة.	353072	فالكون 96 بئر صافي قاع مسطح لزراعة خلايا البوليسترين المعالجة ب TC مع غطاء معقم
الدوامة	فيشربراند		ورليميكسر 75 واط 50-6-هرتز 220-240 فولت
رؤوس مائي بسعة 10 ميكرولتر	شركة غرينر بيو-ون	741015	أسلوب إيزلي لود جيلسون. تخرج، تنظيف، إعادة تعبئة، 960 قطعة
رؤوس بيبيت بسعة 200 ميكرولتر	شركة غرينر بيو-ون	741065	أسلوب إيزلي لود جيلسون. تخرج، تنظيف، إعادة تعبئة، 960 قطعة
أطراف مائية بسعة 1000 ميكرولتر	شركة غرينر بيو-ون	741045	أسلوب إيزلي لود جيلسون. تخرج، تنظيف، إعادة تعبئة، 960 قطعة
رؤوس الماصة المفلترة بسعة 20 ميكرولتر	شركة غرينر بيو-ون	774288	طرف الفلتر على طريقة جيلسون. شفاف، أزرق الرف، معبأ واحد، خالي من R/Dnase، 10 رفوف بسعة 96 قطعة.
رؤوس الماصة المفلترة بسعة 200 ميكرولتر	شركة غرينر بيو-ون	739288	طرف الفلتر على طريقة جيلسون. شفاف، أزرق الرف، معبأ واحد، خالي من R/Dnase، 10 رفوف بسعة 96 قطعة.
أطراف الماصة المفلترة بسعة 1000 ميكرولتر	شركة غرينر بيو-ون	740288	طرف الفلتر على طريقة جيلسون. شفاف، رف أزرق، معبأ واحد، خالي من R/Dnase، 10 رفوف بحجم 60 قطعة