$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات المتعلقة بنماذج من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس مراجعة الطب البيطري في JoVE.
1. التطعيم بسودوموناس aeruginosa
- قم بتخفيف زراعة PAO1:lux بين الليل إلى OD600 = 0.05 في 75 مل من وسط مرق الليسوجيني (LB) الذي يحتوي على 100 ميكروغرام/مل من الكاربينيسيلين، وانمو البكتيريا حتى تدخل الزراعة في المرحلة الأسية المبكرة (OD600≈0.3). يجب أن يستغرق هذا حوالي ساعتين إلى ثلاث ساعات.
- تخفيف PAO1:lux في محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) إلى تركيز (7.5 ± 2.5) ×10 2 CFU/mL. تأكد من تحضير اللقاح الزائد لضمان الحجم الكافي وللسماح للتحضير بعد التجربة. إذا كنت تنقل بين المرافق، استخدم احتواء مزدوج في صندوق مقاوم للتسرب وعليه خطر بيولوجي واضح.
- قم بجميع الأعمال مع P. aeruginosa والفئران باستخدام معدات الحماية الشخصية المعتمدة في خزانة السلامة البيولوجية المعتمدة من مستوى السلامة البيولوجية للحيوان (ABSL-2) (BSC). يجب تغطية المعدات القابلة لإعادة الاستخدام مثل ميزان الوزن بلفافة لاصقة لمنع التلوث.
- قم بتخدير الفأر باستخدام 3٪ من الإيزوفلوران. زن الفأرة وسجل الوزن. حقن الفأر تحت الجلد بكلوريد الصوديوم المعقم 0.9٪ المسخن مسبقا، 250 ميكرولتر على كل جانب ليصبح المجموع 500 ميكرولتر.
- إذا كانت طبقة الغلاف الشفافة من الفأر قد أزلت طوال الليل، قم بإزالة أي قشرة ناتجة بعناية ووضع ضمادة جديدة.
- استخدم حقنة أمان بسعة 500 ميكرولتر من التيوبركولين 27 جيلون لحقن 40 ميكرولتر من تعليق PAO1:lux عبر ضمادة الفيلم الشفاف في كل جرح. يجب استخدام فئران مختلفة للتحكم في الجروح غير الملقحة أو PBS لمنع التلوث المتبادل من الجانب المقابل.
- أعد الفأرة إلى قفصها على وسادة تدفئة وشاشة حتى تستيقظ. يجب أن توضع جميع الفئران بشكل فردي في أقفاص منفصلة لمنع التلوث المتبادل.
- قدم معجون مكملات غذائية عالي السعرات حرارية محشورا بين حبيبات الطعام على أرضية القفص.