مقالة منهجية

اختبار التسلل المشترك لفحص مؤثرات الممرضين التي تثبط كتم الحمض النووي الريبي النباتي

يناير 30, 2026

في هذه المقالة

الملخص

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: شي، ج. وآخرون. فحص وتحديد مثبطات صوت الحمض النووي الريبي من المؤثرات المفرزة لممرضات النباتات. J. Vis. Exp. (2020)

يوضح هذا الفيديو اختبار التسرب المشترك لتحديد بروتينات العامل الممرض التي تثبط إسكات الحمض النووي الريبي في نيكوتيانا بنثاميانا 16c. يتم توصيل مراسل فلوري وجين مؤثر مرشح إلى أوراق النبات عبر البكتيريوم. عادة، يؤدي كتم الحمض النووي الريبي إلى تدهور نصوص المراسلين، مما يقلل من الفلورة. تمنع المؤثرات المثبطة هذه الاستجابة، مما يحافظ على التألق. يقدم هذا الاختبار طريقة سريعة وبصرية لفحص المؤثرات الميكروبية التي تتداخل مع دفاع المضيف.

البروتوكول

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التسلل المشترك نيكوتيانا بنثاميانأوراق a

  1. اخلط كميات متساوية من مزرعة Agrobacterium تحتوي على 35S-GFP مع زراعة Agrobacterium تحتوي على 35S- مثبط فيروس فسيفساء الخيار 2b (CMV2b)، أو مؤثر محتمل، أو ناقل فارغ (EV).
  2. قم بالتغلغل بحذر وببطء في معلقات البكتيريا الزراعية المختلطة على الجوانب الدينية لأوراق N. benthamiana 16c باستخدام حقنة بدون إبر بسعة 1 مل.
  3. أزل التعليق البكتيري المتبقي من الأوراق باستخدام مساحات الأنسجة الرخوة وقم بتدوير حواف البقع المتسربة بقلم الصنع.
  4. اترك النباتات المتغلغلة في غرفة النمو تحت نفس ظروف النمو.

    ملاحظة: لأسباب تتعلق بالسلامة والصحة، يجب ارتداء نظارات واقية للعين وكمامة أثناء التسلل. لمنع التلوث المتبادل، يجب تغيير القفازات أو تعقيم الإيثانول بين التسربات. عادة ما يحتاج إلى ما لا يقل عن 1 مل من معلقات البكتيريوم الزراعية لكل ورقة للتسرب. للسكت المنهجي، سيكون مطلوبا على الأقل ورقتين للتسلل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
مصباح الأشعة فوق البنفسجيةأناليتيك يناUVP B-100APالملاحظة

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

GFP RISC siRNA

مقالات ذات صلة