عزل البكتيريا من الأمعاء الوسطى البعوض

الملخص

المصدر: ليو، إكس، وآخرون. اختبار تغذية بكتيري فموي باستخدام البعوض المعالج بالمضادات الحيوية. J. Vis. Exp. (2020)

يوضح هذا الفيديو تشريح الأمعاء الوسطى للبعوض لعزل بكتيريا الأمعاء. يتم استخراج الأمعاء الوسطى من الجهاز الهضمي، ويتم تجانسها لإطلاق البكتيريا، ثم تغطى على أجار المغذي لزراعة مستعمرات البكتيريا.

البروتوكول

1. تشريح الأمعاء المتوسطة للبعوض
   1. انقل البعوضة المعقمة على السطح إلى شريحة زجاجية باستخدام قطرة من محلول محلول ملحي معقم 1x محلول ملحي (PBS). التشريح تحت المجهر التشريح.
   2. تحت التكبير المنخفض لمجهر التشريح، قم بإزالة ساقي البعوضة وأجنحتها ورأس البعوضة بعناية لمنع الهروب. قم بإزالة آخر جزء من البعوضة عن طريق القطع المباشر بدلا من سحبه، لمنع الجهاز الهضمي من الانهيار.
   3. ثبت صدر البعوضة ونهاية البطن بالملاقط. اسحب الجهاز الهضمي للبعوضة برفق. عادة ما يحتوي الجهاز الهضمي المكتسب على المحاصيل، الأمعاء الأمامية، الأمعاء الوسطى، الأمعاء الخلفية، وأنابيب المالبيجي.
   4. اضبط المجهر التشريحي على تكبير أعلى. قم بإزالة المحاصيل، الأمعاء الأمامية، الأمعاء الخلفية، وأنابيب المالبيغيان من الجهاز الهضمي المفكك للحصول على الأمعاء الوسطى للبعوضة.
   5. كن حذرا أثناء إزالة المحصول، حيث ينتفخ المحصول ويشبه الأمعاء الوسطى بعد تناول البعوض وجبة السكر. أنابيب المالبيجيان، وهي مجموعة من أنابيب الإخراج الطويلة والرفيعة، تقع عند الحدود بين الأمعاء الوسطى والأمعاء الخلفية.
2. عزل بكتيريا الأمعاء
   1. انقل الأمعاء الوسطى المقطوعة إلى أنبوب معقم بسعة 1.5 مل مع 200 ميكرولتر من مخزن PBS معقم 1x.
   2. اطحن الأمعاء المتوسطة على طاولة معقمة جيدا باستخدام مدقة معقمة للسماح بالتحرر الكامل لبكتيريا الأمعاء إلى المخزن المؤقت (المخزن الكهربائي).
   3. قم بتخفيف التجانس تسلسليا إلى ثلاث تخفيفات بعشرة أضعاف. أضف 50 ميكرولتر من كل مخفف إلى طبق الأجار LB (مرق لوريا) وافرعه على الطبق. إذا كان الأمعاء الوسطى تحتوي على تركيز عال من فلورا الأمعاء، فمن الضروري إجراء المزيد من التخفيف التسلسلي لاختيار مستعمرات واحدة.
   4. حضن الصفيحة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة يوم إلى يومين حتى تظهر مستعمرات منفردة.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
عيدس مصري			البعوض الإناث
أنبوب الطرد المركزي	سانغون بيوتيك	F601620-0010	1.5 مل، طبيعي، متخرج، عقيم
مدقة طحن الأنسجة ذات الاستخدام الواحد	سانغون بيوتيك	F619072-0001	70 مم طول، مخروطي، أزرق، عقيم
الملقط	الدفع الخلفي	F11029	التشريح
مسحوق الأجار LB	سانغون بيوتيك	A507003	تريبتون 10.0 جرام، مستخلص الخميرة 5.0 جرام، NaCl 10.0 جرام، أغار 15.0 جرام.
المجهر	زايس	ستيمي508
مخزن PBS 10X	سانغون بيوتيك	E607016	هذا المنتج هو حل 10X. يرجى تخفيفه 10 مرات قبل الاستخدام. قيمة الرقم الهيدروجيني هي 7.4.