التقييم الصناعي لقتل البكتيريا بواسطة الخلايا البلعمية الطحالية للفئران الوليدة

الملخص

المصدر: سيمان، ب. ج.، et.al. نموذج تصوير حديثي الولادة لتعفن البكتيريا سالب الجرام. J. Vis. Exp. (2020)

يوضح هذا الفيديو عزل العدلات والخلايا الأحادية الالتهابية من طحال الفئران الوليدية وتطبيقها في اختبار قتل البكتيريا المتوهج. يشمل التفكك الميكانيكي، وتحليل خلايا الدم الحمراء، وإثراء الخلايا المعتمدة على الخرزات المغناطيسية، وحضانة البكتيريا، والحماية بالمضادات الحيوية. تشير قراءات التلميع الزمنية إلى استيعاب البكتيريا الأولي تليها إزالة مناعية.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات المتعلقة بعينات والموافقة عليها من قبل لجنة مراجعة أخلاقيات المختصة.

1. اختبار قتل البكتيريا في المختبر

1. قم بإزالة الطحال من جرو حديث الولادة غير المصاب وضعه في سلة نايلون بحجم 40 ميكرومتر داخل طبق بتري معقم بحجم 60 مم. كرر ذلك وجمع الطحال في أنبوب واحد ليحصد ويتجانس معا.
2. أضف 5 مل من محلول ملحي مخبأ بالفوسفات (PBS) مع 10٪ مصل أبقار جنيني (FBS).
3. قم بتفكيك الأنسجة باستخدام مكبس حقنة معقمة بسعة 3 مل حتى يتم إنشاء تعليق خلية واحدة.
4. اجمع التعليق أحادي الخلية خارج سلة النايلون، وانقل إلى أنبوب طرد مركزي بسعة 15 مل، وخلايا الحبيبات بقوة 350 × جرام لمدة 5 دقائق.
5. الخلايا في مخزن تحلل خلايا الدم الحمرا....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
مخزن تحليل ACK	جيبكو	LSA1049201	اختبار إزالة البكتيريا
حبيبات مضادة ل-Ly-6B.2 الدقيقة	ميلتيني بيوتيك	130-100-781	عزل الخلايا
الإشريكية القولونية O1:K1:H7-lux (يعبر عن لوسيفيراز)	لا يوجد	لا يوجد	تم بناؤها داخليا في WVU
مخزن العزل	ميلتيني بيوتيك	لا يوجد	اختبار إزالة البكتيريا
إل بي بروت، لينوكس	كواشف فيشر الحيوية	BP1427-500	نمو البكتيريا
مصفاة EASYstrainer (سلة نايلون)	غرينر بيو-ون	542 040	مصفاة الخلايا
سبيكترا ماكس iD3	الأجهزة الجزيئية	لا يوجد	قارئ الألواح