الحقن داخل الصفاق لدهون بوليسكاريد البكتيري في الفئران لدراسة الاستجابات المناعية الجهازية

الملخص

المصدر: رادولوفيتش، ك.، وآخرون. حقن بوليبوليسكاريد في الفئران لمحاكاة دخول المنتجات المشتقة من الميكروبات بعد اختراق الحاجز المعوي. J. Vis. Exp. (2018)

يوضح هذا الفيديو إجراء خطوة بخطوة لحقن بوليبوليسكاريد (LPS) في الفئران داخل الصفاق لتحفيز الالتهاب الجهازي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات المتعلقة بنماذج من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس مراجعة الطب البيطري في JoVE.

1. حقن دهون بوليسكاريد (LPS) داخل الصفاق للفئران
   1. استنشق محلول LPS العامل في حقنة بسعة 0.5 مل مع إبرة 30 جيلون في تدفق هواء طبقي.
   2. وزن أنثى C57Bl/6 فئران (من ستة إلى عشرة أسابيع) واحسب كمية LPS التي ستحقن: 10 ميكرولتر (2 ميكروغرام)/جم وزن الجسم.
      ملاحظة: على سبيل المثال، إذا كان وزن الفأر 20 جرام، فيجب حقن محلول يعمل 20 جرام × 10 ميكرولتر = 200 ميكرولتر في الثانية.
   3. أمسك الفأر بلطف ولكن بحزم وقيد بيد واحدة. تأكد من أن قادر على التنفس بشكل طبيعي دون أن يلتف أثناء التقييد.
   4. ارفع أنف الفأر قليلا نحو الأرض لكشف البطن للحقن. حدد خط منتصف البطن ووضع الحقن في أسفل البطن يسار أو يمين من خط المنتصف. حقن محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) داخل الصفاق (i.p.) بدلا من LPS في فئران التحكم.
   5. باليد الحرة، حقن الحجم المناسب (الحجم المحسوب في الخطوة 1.2) لمحلول LPS العامل. تأكد من أن الإبرة قد دخلت تجويف الصفاق، وإلا قد تحدث حقن خاطئة في طبقة عضلة البطن. ومع ذلك، لا تغوص بعمق كبير بالإبرة في تجويف الصفاق لتجنب إصابة الأعضاء الداخلية الموجودة في تلك المنطقة.
   6. أعد بحذر إلى القفص مع ما يصل إلى 5 فئران في كل قفص.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
LPS إشريكيا قولوني O111:B4	إنفيفوجين، سان دييغو، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية.	TLRL-EBLPS
حقنة الأنسولين أومنيكان 50 لمرة واحدة	ب. براون ميلسونغن، ميلسونغن، ألمانيا	9151125