إعداد مزرعة المكونات العنقودية الذهبية الانحلالية للدم لدراسات تفاعل المضيف والممرض

الملخص

المصدر: بهيرا، ر.ك. وآخرون، طريقة قائمة على التألق لدراسة تنظيم جينات البكتيريا في الأنسجة المصابة. J. Vis. Exp. (2019)

يوضح هذا الفيديو تحضير مزرعات المكورات العنقودية الذهبية المتحللة للدم لتوحيد نمو البكتيريا وتحقيق التزامن الأيضي لدراسات تفاعل المضيف مع الممرض.

البروتوكول

1. تحضير لقاح البكتيريا
   1. سلالات المكورات العنقودية الذهبية ذات الاهتمام بالعزل على صفائح الأجار الدموية من مخزون الجلسرول المجمد. حضانة عند 37 درجة مئوية لمدة 16–24 ساعة لتأكيد الأنماط الظاهرية الانحلالية للدم بناء على قدرتها على تحليل خلايا الدم الحمراء وتكوين مناطق شفافة واضحة.
   2. ابدأ الزراعة الليلية عن طريق تلقيح مستعمرات واحدة من كل سلالة بسعة 4 مل من مرق الصويا التريبتي (TSB) في أنابيب زجاجية معقمة. قم بتدوير الأنابيب عند 37 درجة مئوية لمدة 16–24 ساعة في أسطوانة أنابيب مضبوطة على زاوية تقارب 70° و70 دورة في الدقيقة (RPM).
   3. استخدم مقياس طياف لقياس الكثافة البصرية عند 600 نانومتر (OD₆₀₀) من الثقافات من الخطوة 2.1.2. استخدم الوسط المعقم كمرجع بصري (فارغ). قم بتخفيف هذه الخلايا إلى كمية OD₆₀₀ بمقدار 0.05 في 25 مل من مرق الصويا التريبتيكي المعقم (TSB) في قوارير منفصلة بحجم 125 مل من ديلونغ (نسبة 5:1 إلى حجم القارورة) وحضنة الثقافات في حمام مائي (لنقل الحرارة بشكل صحيح إلى الزرعات)، مع هز عند 280 دورة في الدقيقة وضبطه على 37 درجة مئوية.
      ملاحظة: يمكن إجراء نمو اللقاح بطرق مختلفة؛ يتم تقديم طريقة واحدة لنمو الخلايا إلى الطور الأسي. ومع ذلك، من المهم استخدام نفس الطريقة باستمرار لتحضير الخلايا للتطعيم.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
5٪ دم غروف	هاردي ديسجنوستيكس (سانتا ماريا، كاليفورنيا)	A10
حمام الماء المهتز المداري	نيو برونزويك إنوفا	NA
مرق الصويا التربتيكي	VWR	90000-376
مقياس طياف الفوتومتري الشفاف فوق بنفسجي	بيكمان كولتر-DU350	NA