إجراء كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة لتقييم تحلل إكسوبوليسكاريدات البكتيرية

الملخص

المصدر: هو، ي.، وآخرون. تحليل التفاعلات بين الإندوبيوتيكس وميكروبيوم الأمعاء البشرية باستخدام أنظمة التخمير في الحمام الصناعي. J. Vis. Exp. (2019)

يوضح هذا الفيديو استخدام الكروماتوغرافيا ذات الطبقة الرقيقة (TLC) لتقييم تحلل السكريات الخارجية (EPS) بواسطة ميكروبيوتا البراز البشري. يتم فصل شظايا EPS في المواد الفائقة للتخمير بناء على الحجم والقطبية باستخدام TLC، ثم تصور كشرائط ملونة بعد التلوين الخاص بالكربوهيدرات.

البروتوكول

1. تحلل إكسوبوليسكاريد (EPS) بواسطة ميكروبيوتا البراز البشرية

1. تحميل 0.2 ميكرولتر من المواد الفائقة المخمرة على ألواح الألمنيوم المطلية مسبقا من جل-60 من كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة (TLC)، ثم جففها باستخدام مجفف الشعر.
2. طور الألواح في محلول 20 مل من حمض الفورميك/n-بيوتانول/ماء (6:4:1، v:v:v) وجففها باستخدام مجفف شعر.
3. انقع الألواح في مادة الأورسينول للصبغ، ثم جففها باستخدام مجفف الشعر.
   1. تحضير كواشف الأورسينول عن طريق إذابة 900 ملغ من الأشنول في 25 مل من الماء المقطر، ثم إضافة 375 مل من الإيثانول. نتيجة لذلك، يجب إضافة حمض الكبريتيك المركز ببطء وخلط المحلول جيدا.
4. سخن الألواح على حرارة 120 درجة مئوية لمدة 3 دقائق في فرن الخبز وقيم تدهور EPS بقياس نطاقات TLC.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
فرن الخبز	شركة شنغهاي ييهنغ للأدوات العلمية المحدودة	DHG-9240A	استخدم للتسخين والخبز
الإيثانول	سيغما-ألدرتش	E7023	الاستخدام لتحضير فيتامين K1
حمض الفورميك	سيغما-ألدرتش	399388	يستخدم في TLC
ليشنول	سولاربيولوجيا	C8380	الاستخدام لتحضير لوحة الألوان
ن-بوتانول	كيمسبايدر	71-36-3	يستخدم في TLC
أورسينول	سيغما-ألدرتش	447420	يستخدم لتحضير كواشف الأورسينول
حمض الكبريتيك	سيغما-ألدرتش	150692	يستخدم لتحضير كواشف الأورسينول
صفائح الألمنيوم TLC	ميرك ميليبور	116835	يستخدم في TLC