دراسة النشاط الميكروبي للأمعاء البشرية على السكريات الخارجية

الملخص

المصدر: هو، ي. et.al.، تحليل التفاعلات بين الإندوبيوتيك وميكروبيوم الأمعاء البشرية باستخدام أنظمة التخمير في الحمام الصناعي. J. Vis. Exp. (2019)

يوضح هذا الفيديو تحليل إنتاج الأحماض الدهنية قصيرة السلسلة بواسطة ميكروبيوتا الأمعاء البشرية استجابة للسكريدات الخارجية البوليسكاريدية. يبرز هذا فصل وقياس منتجات التخمير الميكروبي باستخدام كروماتوغرافيا الغاز. تكشف النتائج أن السكريات الخارجية تعدل المستقلبات الميكروبية التي تؤثر على ديناميكيات المضيف والممرض في الأمعاء.

البروتوكول

1. تأثيرات إكسوبوليسكاريد (EPS) على إنتاج الأحماض الدهنية قصيرة السلسلة (SCFA) بواسطة ميكروبيوتا الأمعاء البشرية
   1. أضف المواد الفائقة المخمرة (1 مل) المحضرة في خطوة 5.3 إلى 2 مل من أنابيب الطرد المركزي.
   2. أضف 0.2 مل من حمض الميتافوسفوريك 25٪ (مع الفولت) إلى كل عينة وامزج المحاليل جيدا عن طريق الدوامة.
   3. قم بعمل الطرد المركزي للخلطات عند 13,000 × جرام لمدة 20 دقيقة وانقل المواد الفائقة إلى أنابيب جديدة.
   4. بالتزامن، جهز محاليل من أحماض 120 ملليموتر من الأسيتيك والبروبيوني والبوتيريك والإيزوبيوتيريك والفاليريك والإيزوفاليريك. ثم أضف 1 مل من كل حمض جاهز إلى 1.2 مل من 25٪ (بدون جدول) حمض الميتافوسفوريك واستخدمه ككوكتيلات قياسية.
   5. تصفية العينات باستخدام غشاء بحجم 0.22 ميكرومول.
   6. اكتشاف تركيزات SCFA باستخدام كروماتوغرافيا الغاز عالية الأداء.
      ملاحظة: يستخدم عمود InertCap FFAP (0.25 mM × 30 م × 0.25 ميكروM) في كروماتوغرافيا الغاز (GC). ثم يتم قياس تركيزات SCFA بناء على مناطق الذروة باستخدام الطريقة القياسية الداخلية ذات النقطة الواحدة في حزمة برمجيات GC Solution.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
مرشحات غشاء 0.22 ميكرومتر	ميليبور	SLGP033RB	الاستخدام لتصفية العينات
منخل 0.4 مم	ثيرمو فيشر	308080-99-1	الاستخدام لتحضير عينات براز الإنسان
خليطي	سيغما-ألدرتش	71251	عينة قياسية ل SCFA
بوتيريك	سيغما-ألدرتش	19215	عينة قياسية ل SCFA
العمود الشعري	شيمادزو-جي إل	InertCap FFAP (0.25 مم × 30 م × 0.25 ميكرومتر)	يستخدم لاكتشاف SCFA
كروماتوغرافيا الغاز	شركة شيمادزو	GC-2010 Plus	يستخدم لاكتشاف SCFA
الإيزوبيوتيريك	سيغما-ألدرتش	46935-U	عينة قياسية ل SCFA
أحماض إيزوفاليريك	سيغما-ألدرتش	129542	عينة قياسية ل SCFA
حمض الميتافسفوريك	سيغما-ألدرتش	B7350	عينة قياسية ل SCFA
لا أوه	سيغما-ألدرتش	30620	المحلول الأساسي المستخدم لضبط درجة الحموضة في المخازن
بروبيونيك	سيغما-ألدرتش	94425	عينة قياسية ل SCFA
فاليريك	سيغما-ألدرتش	75054	عينة قياسية ل SCFA