استعمار الأمعاء وتحفيز الإسهال بواسطة Vibrio cholerae في أسماك الزرد البالغة

الملخص

المصدر: ناج، د.، et.al. قياس استيطان وإسهال Vibrio cholerae في نموذج سمك الزرد البالغ. J. Vis. Exp. (2018)

يوضح هذا الفيديو تطعيم سمك الزرد البالغ بسلالة فيبريو كوليرا الممرضة لدراسة استعمار الأمعاء ونتائج الأمراض. يظهر كيف تعطل السموم البكتيرية سلامة الأمعاء، مما يؤدي إلى تسرب السوائل، وإفراز المخاط، والإسهال المائي قبل تجهيز الأسماك لمزيد من التحليل.

البروتوكول

1. تلقيح سمك الزرد بالغمر
   ملاحظة: يشبه هذا التعرض المسار الطبيعي للعدوى.
   1. تحضير فيبريو كوليرا
      1. قم بتلقيح 5 مل من مرق الليسوجيني (LB) بمستعمرة معزولة من V. cholerae من صفيحة LB وحضنها عند 37 درجة مئوية مع هز (180 دورة في الدقيقة) لمدة 6–8 ساعات (زراعة ليلية).
      2. تلقيح 25 مل من وسط LB الطازج المعقم في قارورة مخروطية بحجم 250 مل مع 50 ميكرولتر من الزراعة المذكورة أعلاه خلال الليل. حضنه لمدة 16–18 ساعة عند 37 درجة مئوية مع الرج (150 دورة في الدقيقة).
      3. اقرأ الكثافة البصرية عند 600 نانومتر (_{OD 600}) من تخفيفة....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
الآلة
الحاضنة	نوير، بليموث، مينيسوتا	التدفق التلقائي
المواد
كؤوس زجاجية بسعة 400 مل	بايركس
الأغطية المثقبة	حامل النصيحة الدقيقة مع ثقوب من صندوق البقشيش
نظام حوض الأسماك	أكواينيرينغ، سان دييغو، كاليفورنيا
جهاز تنقية المياه RO	أكوا إكس إكس	TK001
شبكة صيد	مارينا
طعام الأسماك	تترا فين
لوحة بتري	فيشر براند، هامبتون، نيوهامبشاير	FB0875713
أنبوب طرد مركزي بسعة 1.5 مل	ميدساي، فالي بارك، ميزوري	AVSS1700
أنابيب الاختبار	بايركس	9820
الماصات الدقيقة	سارتوريوس بيوهيت، غوتنغن، ألمانيا	M1000/M200/M20
نصائح	جينيسي ساينتيفيك، سان دييغو، كاليفورنيا	24-150RS/24-412
LB متوسط
تريبتون	كلية العلوم الحيوية في كلية الأعمال، سان خوسيه، كاليفورنيا	211705
مستخلص الخميرة	كلية العلوم الحيوية في كلية الأعمال، سان خوسيه، كاليفورنيا	212750
NaCl	فيشر ساينتفيك، هامبتون، نيو هامبشاير	BP358-212
أغار	كلية العلوم الحيوية في كلية الأعمال، سان خوسيه، كاليفورنيا	214010