تحضير جرعة غاردنيلا المهبلية لنمذجة التهابات المسالك البولية المتكررة في الفئران

الملخص

المصدر: أوبراين، نائب الرئيس وآخرون. التهاب المسالك البولية المتكرر في الإشريكية القولونية ناجم عن تعرض المثانة المهبلية في الفئران. J. Vis. Exp. (2020)

يوضح هذا الفيديو تحضير لقاح غاردنيلا المهبلي لإنشاء نموذج فأر لعدوى المسالك البولية المتكررة.

البروتوكول

1. حضر لقاح غاردنيريلا المهبلي
   ملاحظة: تتم جميع الخطوات في غرفة لا هوائية. تختلف أوقات حضانة الزراعة المثالية بين السلالات المختلفة من G. vaginalis، حيث تدخل بعض السلالات مرحلة الثبات وتبدأ حتى في الموت بسرعة أكبر من غيرها. لذا، يجب تحديد أوقات الحضانة تجريبيا لسلالة معينة قبل إجراء التجارب على الفئران. لا يعرف ما إذا كانت السلالات الأخرى أو كلها من G. vaginalis ستسبب نفس التأثيرات في هذا النموذج.
2. تصفية Streak G. vaginalis من مرق الفريزر بدرجة حرارة -80 درجة مئوية على طبق NYCIII (بدون مضادات حيوية). حضن الصفيحة عند 37 درجة مئوية بشكل لاهوائي لمدة 24 ساعة.
3. في الحجرة اللاهوائية، قم بتلقيح 5 مل من وسط NYCIII اللاهوائي مع حلقة 1 ميكرولتر من الخلايا (مستعمرة واحدة غير كافية) من صفيحة NYCIII وحضن الزراعة بشكل ثابت عند 37 درجة مئوية تحت ظروف لاهوائية لمدة 18 ساعة. لا تدرج المضادات الحيوية في وسط النمو.
4. تحديد OD⁶⁰⁰ للثقافة باستخدام مقياس طياف فوتومتر
   1. يقوم الطرد المركزي بحجم محدد (X) من الزراعة عند 9600 × جرام لمدة دقيقة واحدة ويستنشق الوسط. احسب حجم (Y) محلول ملحي مخزن الفوسفات (PBS) لإعادة تعليق الحبيبة لتحقيق الكثافة البصرية المطلوبة للتلقيح (OD) لتحقيق وحدات تشكيل مستعمرة 10⁸ (CFU) في 50 ميكرولتر باستخدام المعادلة التالية: X مل × ODculture = Y مل × ^لقاح OD ، حل YY = (X ml × ODculture) / ^لقاح OD
      ملاحظة: ^لقاح جرعة الجرعة الزائدة لل JCP8151B^SmR هو 5، لكن يجب تحديد ذلك تجريبيا لسلالات G. vaginalis الأخرى. على سبيل المثال، إذا كنت ندور 3 مل من JCP8151B^SmR لزراعة سائلة بين الليل باستخدام ODculture = 2.0: Y= (3 مل × 2.0) / 5.0؛ لذلك، أعد تعليق الحبيبات في 1.2 مل PBS.
   2. أعد تعليق الحبيبات البكتيرية في PBS إلى التركيز المطلوب. يتم تخفيف اللقاح وتغطيته بشكل تسلسلي لتحديد الجرعة الفعلية المستخدمة في كل تجربة. لا تعتمد فقط على قيم OD.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
الجلوكوز	سيغما	G7528	بالنسبة لوسط نمو NYCIII G. vaginalis
4-(2-هيدروكسي إيثيل)-1-بيبيرازين إيثانيسلفونيك حمض (HEPES)	سيلغرو	25-060-Cl	بالنسبة لوسط نمو NYCIII G. vaginalis
كلوريد الصوديوم	سيغما	S3014	بالنسبة لوسط نمو NYCIII G. vaginalis
ببتون بروتوز #3	فيشر	DF-122-17-4	بالنسبة لوسط نمو NYCIII G. vaginalis
مستخلص الخميرة	فيشر	DF0127-17-9	بالنسبة لوسط نمو NYCIII G. vaginalis
مقياس الطيف الفوتوني	بيوكروم	80-3000-45	قياس OD600 البكتيري
الستربتوميسين	جيبكو	11860038	أضف إلى G . vaginalis NYCIII اللوح الانتقائية (1 ملغ/مل)