نموذج فأر لدراسة الانتقال الممرضي لمجمع المكورات الرئوية بعد العدوى الفيروسية المشتركة

الملخص

المصدر: لينهارد، أ. وآخرون. نموذج الفأر لانتقال المكورات الرئوية العقدية من مستعمرة إلى ممرض عند العدوى الفيروسية المشتركة يعيد المرض المتفاقم بسبب التقدم في العمر. J. Vis. Exp. (2022)

يوضح هذا الفيديو نموذج عدوى مشتركة للفأر حيث يؤدي فيروس الإنفلونزا إلى انتقال المكورات الرئوية العقدية من مستعمرة إلى مسبب مرض. يوضح الخطوات المتضمنة في استعمار البكتيريا، والعدوى الفيروسية، وتطور الأمراض.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات المتعلقة بنماذج الحيوانات من قبل لجنة رعاية الحيوانات المؤسسية المحلية ومجلس مراجعة الطب البيطري في JoVE.

1. التطعيم الأنفي للفئران التي نمت على الأغشية الحيوية، محصنة المكورات الرئوية (S. pneumoniae)

1. اشتر فئران واستخدمها في العمر المطلوب.
   ملاحظة: يفضل الفئران التي تتراوح أعمارها بين 3-4 أشهر على نمذجة المضيفين الصغار، ويمكن استخدام الفئران التي تتراوح أعمارها بين 21-24 شهرا لنمذجة كبار السن >65 سنة. البيانات المعروضة هنا من فئران ذكور C57BL/6.
2. قم بإذابة البكتيريا الناتجة عن الأغشية الحيوية على الجليد وادور عند 1,700 × جرام لمدة 5 دقائق. قم بإزالة المادة الفائقة بعناية دون إزعاج الحبيبات، وغسل البكتيريا بإعادة تعليق الحبيبات في 1 مل من محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS)، ثم قم بتدوير القرص مرة أخرى عند 1,700 × جرام لمدة 5 دقائق. قم بإزالة المادة الفائقة وأعد تعليق الحبيبة في الحجم اللازم للوصول إلى التركيز المطلوب (استهدف 5 × 10 أو⁶ وحدات تكوين مستعمرات (CFU)/10 ميكرولتر للتطعيم الأنفي). تأكد من كمية البكتيريا المعطاة عن طريق وضع اللقاح المحضر على ألواح الأجار الدموية.
3. قم بتطعيم الفئران عن طريق الأنف ب 5 × 10⁶ وحدة CFU عن طريق حقن 5 ميكرولتر من اللقاح المخفف في كل ناريس. تأكد من تثبيت الفئران بإحكام، مع تثبيت الرأس، حتى يتم استنشاق الحجم (عادة خلال ثوان من حقن الحجم في الفتحات). قم بهذه الخطوة في غياب التخدير لمنع شفط اللقاح الرئوي.

2. العدوى الفيروسية بفيروس الإنفلونزا A (IAV)

1. بعد 48 ساعة من التلقيح الأنفي ب S. pneumoniae، يذيب السلالة الالتهابية الداخلية المثيرة للاهتمام على الجليد.
   ملاحظة: البيانات المعروضة هنا تتعلق بسلالة متكيفة مع الفأر من فيروس الإنفلونزا A A/PR/8/34 H1N1 تم الحصول عليها عبر تبادل تعاوني.
2. بمجرد ذوبان الفيروس، قم بتخفيف الفيروس في PBS إلى التركيز المطلوب؛ استهدف 20 وحدة مكونة لويحات (PFU)/50 ميكرولتر للعدوى داخل القصبة الهوائية و200 وحدة PFU/10 ميكرولتر للعدوى الأنفية. بالنسبة للمجموعات المصابة بالوهمية والبكتيريا فقط، استخدم PBS لتطعيم الفئران.
3. ضع مزلق العيون على عيون الفئران قبل التخدير. قم بتخدير الفئران باستخدام إيزوفلوران 5٪ وتأكيد التخدير بقرص إصبع القدم.
4. بمجرد تخدير الحيوان، قم بإزالته من حجرة الإيزوفلوران وإصابة الفئران المخدرة فورا ب 50 ميكرولتر (20 PFU) من الالتهاب الداخلي داخل القصبة الهوائية باستخدام ملقط غير حاد لسحب اللسان من الفم وصب حجم السائل عبر القصبة الهوائية.
5. ضع الفئران في قفص منفصل وراقبوا حتى التعافي الكامل (يمكنهم الحفاظ على الاستلقاء في عظم القص [قادرين على الاستلقاء بشكل مستقيم على الصدر]).
6. بعد التعافي، قم بتلقيح الفئران فورا عن طريق الأنف بجرعة 10 ميكرولتر (200 PFU) من اللقاح الصناعي باستخدام طريقة التلقيح في الخطوة 1.3.
7. فئران المنزل التي خضعت لعدوى بكتيرية وفيروسية فردية أو مزدوجة مع نفس مجموعة العدوى ومنفصلة عن المجموعات الأخرى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
حمض 4-أمينوبنزويك	فيشر	AAA1267318	تخزين Mix I
فلاتر 100 ميكرومتر	فيشر	07-201-432
أنابيب البولي إيثيلين داخل الطب الطبي	فيشر	427410	أنابيب لغسل الأنف
حقن BD ذات الاستخدام الواحد مع رؤوس Luer-Lok (1 مل)	فيشر	14-823-30
D39	المجموعة الوطنية لثقافة الأنواع (NCTC)	NCTC 7466	سلالة المكورات الرئوية العقدية
بيفيتال إيزوفلوران	باترسون بيطري	07-893-8440	إيزوفلوران للتخدير أثناء العدوى
دم العلم الحراري مع جينتاميسين	فيشر	R01227	ألواح أجار دموية تحتوي على المضاد الحيوي جنتاميسين
TIGR4	ATCC	BAA-334	سلالة المكورات الرئوية العقدية