قياس كمية المكورات العقدية من المجموعة ب في تجويف المهبل لدى الفأر عبر المسحة والزراعة الكروموجينية

الملخص

المصدر: باتراس، ك. أ. & دوران، ك. س. نموذج فأر لاستعمار المكورات العقدية من المجموعة ب. J. Vis. Exp. (2016)

يوضح هذا الفيديو قياس كمية حمل المكورات العقدية من المجموعة B المهبلية (GBS) في نموذج فأر باستخدام المسحة والزراعة الكروموجينية. يوضح الخطوات المتبعة في جمع العينات، ووضع الدروع، وعد المستعمرات لقياس حمل متلازمة GBS في تجويف المهبل في الفأر.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات المتعلقة بنماذج الحيوانات من قبل لجنة رعاية الحيوانات المؤسسية المحلية ومجلس مراجعة الطب البيطري في JoVE.

1. مسح التجويف المهبلي لقياس كمية الحمل السليم

1. جهز أنبوب طرد مركزي دقيق واحد بسعة 1.5 مل لكل فأر بإضافة 100 ميكرولتر من محلول ملحي مخبأ بالفوسفات (PBS). قبل المسح مباشرة، قم بترطيب المسحة مسبقا باستخدام PBS.
2. قيد الفأر وأدخل المسحة بمقدار 10 مم في التجويف المهبلي. قم بتدوير المسحة بلطف 4 مرات مع عقارب الساعة وأربع مرات عكس اتجاه عقارب الساعة، مع تطبيق ضغط خفيف على جدار المهبل.
3. انقل المسحة إلى أنبوب الطرد المركزي الدقيق بسعة 1.5 مل مع 100 ميكرولتر من PBS. قبل الطبق، قم بتدوير أنبوب الطرد المركزي الدقيق لمدة ~15 ثانية لتحرير البكتيريا من المسحة. يتم تخفيف كل عينة بشكل تسلسلي في PBS ولوحة بحجم 20 ميكرولتر من التخفيفات بنسبة 1:10 إلى 1:10,000 على ألواح أجار متوسطة تفاضلية محضرة حسب تعليمات الشركة المصنعة. حضن الصفائح عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. ستظهر مستعمرات المكورات العقدية من المجموعة ب (GBS) إما باللون الوردي الزاهي أو البنفسجي الفاتح. ستتثبط النباتات الداخلية الأخرى، أو ستظهر كمستعمرات زرقاء أو بيضاء أو رمادية.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
مسحات الإحليل التناسلية، المعقمة، من ألجينات الكالسيوم	البيوريتانية	25-801 A 50
كروماغار StrepB	DRG International	SB282
محلول الملح المخزن بالفوسفات من دولبيكو 1x	كورنينغ	21-031-CV