$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. الكمية البنفسجية البلورية لتكوين الأغشية الحيوية في A. baumannii S1
- ازرع مزرعة بحجم 5 مل من Acinetobacter baumannii S1 (A. baumannii) في مرق الليسوجيني (LB) (تريبتون 10 جرام/لتر، مستخلص الخميرة 5 جرام/لتر) عند 30 درجة مئوية في حاضنة هز (220 دورة في الدقيقة) لمدة 16 ساعة.
- قم بضبط زراعة A. baumannii S1 إلى كثافة بصرية مرغوبة عند 600 نانومتر (OD₆₀₀) بقيمة 0.8. باستخدام صفيحة بسعة 96 بئر، قم بتلقيح مزرعة البكتيريا (تخفيف بنسبة 1:100) في LB طازج يحتوي على 10 ميكرولتر من إنزيم GKL المنقى (40 ملغ/مل)؛ المجلد النهائي للثقافة الجديدة هو 100 ميكرولتر.
- جهز ثقافة التحكم أيضا؛ هذا لن يحتوي على أي إنزيم. كرر ظروفا مشابهة للحصول على العدد المطلوب من النسخ المكررة.
- غط الطبق بغطاء وضعه في حاوية بلاستيكية محكمة الإغلاق بسعة 10 لتر. حضن اللوحة على حرارة 30 درجة مئوية لمدة 3 ساعات قبل إزالة الوسط بلطف.
- أضف 100 ميكرولتر أخرى من الوسط الطازج إلى البئر وحضن الطبق لمدة 21 ساعة عند 30 درجة مئوية.
- بعد الفترة الثانية من الحضانة، أزل جميع الوسائط بلطف. اغسل خلية البكتيريا العوالق بماء معقم سعة 200 ميكرولتر. تأكد من وجود اضطراب طفيف جدا للخلايا أثناء الغسيل.
- أضف 100 ميكرولتر من محلول البنفسجي البلوري بنسبة 1٪ إلى كل بئر وحضنه لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. أزل محلول البنفسج الكريستالي بغسل البئر بماء معقم سعة 200 ميكرولتر. كرر الغسيل مرتين إضافيتين.
- أضف 100 ميكرولتر من حمض الخليك 33٪ إلى كل بئر وحضن لمدة 15 دقيقة مع هز لطيف؛ هذا سيذيب الصبغة.
- قم بقياس كمية الغشاء الحيوي المتكون بقياس امتصاص البنفسجي البلوري عند 600 نانومتر. كمية البنفسج الشفاف تتناسب مع كمية الغشاء الحيوي المتكون.