تحضير مزرعة بكتيرية في التربة لعدوى العاثيات

الملخص

المصدر: كروس، ت.، وآخرون، تقنية إثراء محسنة لعزل أنواع عاثوم البكتيريا المفصلية من عزلات عينات التربة. J. Vis. Exp.(2015)

يوضح هذا الفيديو تحضير مزرعة بكتيرية لإنتاج العاثيات البكتيرية. يغطي خطوات تلقيح بكتيريا التربة في قارورة محشوبة، وتعزيز النمو الموحد من خلال التهوية والهز، ومراقبة كثافة الخلايا باستخدام قياسات الكثافة البصرية. بمجرد أن تصل الزراعة إلى مرحلة النمو المثلى، تكون جاهزة لإنتاج بكتيريوفاج بكفاءة.

البروتوكول

تحضير خلايا المفصليات لعزل الفاج

• ثقافة Arthrobacter sp. كانت مستعمرات KY3901 تخطف على صفيحة أجار لوريا بيرتاني (LB) حضنت عند 30 درجة مئوية لمدة يومين إلى ثلاثة أيام. اختر مستعمرة واستخدم حلقة معقمة لإضافتها إلى 250 مل من مرق LB في قارورة زراعة محبطة، وحضن في حاضنة هز بسرعة 225 دورة في الدقيقة عند 30 درجة مئوية.
• اترك حوالي 24 ساعة من النمو للحصول على خلايا متأخرة أسية/ثابتة مبكرة لتجارب عدوى الفاج. راقب حالة نمو البكتيريا عن كثب لمنع دخول الخلايا إلى حالة النمو الثابت الوسطى إلى المتأخرة.
  ملاحظة: يجب أن يتكون نمو الخلايا من كثافة بصرية OD₆₀₀ بين 0.5-0.0.7 لعزل الفاج وإجراءات/خطوات التنقية.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
مسحوق المرق LB	فيشر	BP9722-2
الأجار المحبب	فيشر	BP1423-2
أنابيب إيبندورف	فيشر	05-408-129
ماصات 5 مل فردية	فيشر	13-678-11D
أنابيب مخروطية بحجم 50 مل	فيشر	76002844
أنابيب مخروطية بحجم 15 مل	فيشر	76002845
ماصات 10 مل فردية	فيشر	13-676-10J
ماصات 25 مل فردية	فيشر	13-676-10K