عدوى المسالك البولية المرتبطة بالقسطرة في نموذج الفأر

الملخص

المصدر: كونوفر، م. س. وآخرون، ج. تأسيس وتوصيف التهابات المسالك البولية وCAUTI في نموذج الفأر. J. Vis. Exp. (2015)

يوضح هذا الفيديو عملية تجميع وزرع قسطرة عبر الإحليل في فأرة أنثى، تليها التلقيح البكتيري لتحديد عدوى المسالك البولية المرتبطة بالقسطرة ودراسة التفاعلات بين المضيف والممرض بواسطة الفيلم الحيوي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات المتعلقة بنماذج الحيوانات من قبل لجنة رعاية الحيوانات المؤسسية المحلية ومجلس مراجعة الطب البيطري في JoVE.

1. بروتوكول نموذج CAUTI (عدوى المسالك البولية المرتبطة بالقسطرة)، تحضير إبرة القسطرة لنموذج CAUTI

1. أزل غطاء إبرة 30 جيلون. اقطع قطعة 7 مم من أنابيب PE10 (بولي إيثيلين 10) وقطعة 5 مم من أنابيب السيليكون مثل RenaSIL. قم بتمرير الإبرة بأنبوب PE10 حتى تلمس الأنبوب قاعدة الإبرة.
2. ثم أدخل قطعة 5 مم على الإبرة التي تحتوي على PE10. الأشعة فوق البنفسجية (UV) تعقم مجموعات الإبر طوال الليل.
   ملاحظة: عند تحميل أنبوب السيليكون، اترك حوالي 1 مم من الأنبوب يمتد بعد طرف الإبرة.

2. تحضير اللقاح البكتيري E. faecalis OG1RF

1. حضر لقاح OG1RF بدءا من 48 ساعة من يوم التطعيم. شريط OG1RF على طبق BHI (حقن القلب في الدماغ) من مخزن مجمد.
2. اختر مستعمرة وقم بتلقيحها ب 10 مل من BHI ونمها بشكل ثابت لمدة 18 ساعة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. قم بطرد مركزي للزراعة واغسل الحبيبات (3 مرات) في 1 مل من كمية 1 مل من PBS معقم 1x.
3. أعد تعليق الحبيبات البكتيرية في محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS). قس الكثافة البصرية للبكتيريا وضبط التركيز إلى الحجم المطلوب للتلقيح. التركيز القياسي للتلقيح المستخدم هو 10⁷؛ ومع ذلك، قد يختلف هذا بسبب تصميم الدراسة

3. زرع القسطرة

1. نظف محطة العمل بنسبة 70٪ إيثانول وغط المنطقة بغطاء ماص (أو استخدم غطاء تدفق معقم).
2. قم بتوصيل إبرة قسطرة بحقنة فارغة بحجم 1 مل (TB أو tuberculin). اقطع قطعة مربعة من البارافيلم بحجم 1 بوصة وضع طبقة من المزلق الجراحي (بحجم عشرة سنتات تقريبا) فوقها.
   ملاحظة: تستخدم إبرتان مختلفتان لترسيب القسطرة ولتقليل التلقيح العرضي بسبب التلاعب الميكانيكي اللازم لزرع القسطرة. وهذا يسمح أيضا بتحضير عدد أقل من إبر التطعيم.
3. قم بتخدير فئران C57BL/6 بوضعها في جرة زجاجية بسعة 32 أونصة تحتوي على كرة مبخنة شاي مع كرات قطنية منقوعة في 3 مل من الإيزوفلوران أو غرفة تبخير (وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة) حتى تفقد وعيها لكنها لا تزال تتنفس بشكل طبيعي (نفس واحد في الثانية).
4. ثم ضع الفأر على ظهره على منشفة ورقية وافرد ساقيه. غط أنف الفأر بمخروط أنف أو أنبوب مخروطي بحجم 50 مل مع كرات قطنية تحتوي على كمية صغيرة (حوالي 1-2 مل) من الإيزوفلوران.
   تحذير: الإيزوفلوران هو مخدر استنشاقي. استخدم في مكان جيد التهوية ويقلل من استنشاق الباحث.
5. قم بخفقان المثانة بلطف لتحفيز التبول وضمان فراغ المثانة. امسح منطقة الإحليل بمسح 100٪ إيثانول.
6. قم بتعقيم المنطقة المحيطية بإحليل البول بمحلول بوفيدون-يود بنسبة 10٪ باستخدام أداة تطبيق ذات رأس قطني. امسح إبرة اللقاحن/الحقنة، النقطة أولا، في مزلق الجراحة.
   ملاحظة: يستخدم بوفيدون-يودين لزرع القسطرة، وهو محلول معقم أقوى من الكحول. يتطلب زرع القسطرة المزيد من التلاعب الميكانيكي لإدخال القسطرة، وبالتالي يكون له احتمال أكبر للتلوث.
7. أدخل القسطرة في فتحة الإحليل. بمجرد التركيب، استخدم الملقط لدفع الجزء الطويل (7 مم PE10) نحو المثانة، مما يؤدي إلى دفع القسطرة الصغيرة (5 مم السيليكون) ووضعها في المثانة. قم بإزالة الإبرة مع بقاء أنبوب 7 مم متصلة فورا.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
المواد اللازمة لتحضير القسطرة والإبرة:
إبر 30 جيلوبانا	BD Precision Glide	305106	30 جيجابايت × 1/2 (0.3 مم × 13 مم)
أنابيب البولي إيثيلين PE10	BD	427400	القطر الداخلي -0.011 بوصة (0.28 مم)؛ القطر الخارجي – 0.024 بوصة (0.61 مم)
أنابيب السيليكون المعالجة بالبلاتين RenaSIL 025	شركة برينتري العلمية، إنك	أخت الأخت 025	القطر الداخلي - 0.012 × القطر الخارجي 0.025، لفائف 25 قدم
المواد للعدوى:
الإيزوفلوران – إيزوثيزيا	باتلر شاين	29405	250 مل
جرة زجاجية شفافة مستقيمة الجوانب	كيمبل تشيس	5413289V 21
جهاز شاي من الفولاذ المقاوم للصدأ	شيفز-أمازون		جهاز نفخ شاي فاخر من Schefs - الفولاذ المقاوم للصدأ - سعة كبيرة -
كرات القطن غير المعقمة	فيشربراند	22-456-880
أنابيب فالكون بسعة 50 مل	VWR	89039-660
جهاز تبخير إيزوتك 3	أوهميدا	1224478
ثقب الأذن	فيشر ساينتيفك	13-812-201	(عند الضرورة)
محلول البيتادين	محلول البيتادين		محلول موضعي من بوفيدي-يود 10٪
أعواد قطن	فيشر ساينتيفك	22-037-924	6 إنشات
حفاضات للبنش	فيشربراند	14206 63	الوسادات الداخلية الماصة (حصائر 20"X36")
المزلق الجراحي	سيرجيلوب	0281-0205-36
مقص التشريح	أدوات العلوم الدقيقة، INC	14084-08
ملقط الميكرو-أدسون	أدوات العلوم الدقيقة، INC	11018-12
حقنة بحجم 1 مل	BD	309659	رأس انزلاق التوبركولين
بارافيلم	بيميس	PM996	4 إنش × 125 قدم
رف إيبندورف	فيشربراند	05-541-1
أنابيب إيبندورف	MIDSCI	AVX-T-17-C
حصاد القسطرة، والمثانة، والكلى:
الهومونينازر	PRO Scientific INC	بيو-جين برو 200
أنبوب بولي بروبيلين دائري القاع بسعة 5 مل	BD	352063	لتوحيد الأعضاء
منشفة ورقية	جورجيا-باسيفيك
الإيثانول	فارمكو-آبير	11100020S	200 برهة
ألواح Costar™ Clear Polystyrene 96-Well	كورنينغ	3788
1x ملح فوسفات الصوديوم	سيغما-ألدرتش	P3813
منظف برانسونيك بالموجات فوق الصوتية 1210	شركة برانسون للأشعة الصوتية	1210