تأسيس نموذج للفئران لعدوى الحروق بالبكتيريا الممرضة

الملخص

المصدر: وانغ، ي.، وآخرون. في الحياة دراسة العلاج بالضوء الأزرق المضاد للميكروبات لعدوى الحروق المقاومة للأدوية متعددة Acinetobacter baumannii باستخدام التصوير التوهجي الحيوي. J. Vis. Exp. (2017)

يوضح هذا الفيديو كيفية إثبات عدوى الحرق في نموذج الفأر عن طريق تطبيق كتلة نحاسية ساخنة تليها لقاح بكتيريا ممرض. تستعمر البكتيريا المصفوفة خارج الخلية المكشوفة وتشكل غشاء حيوي، مما يتيح دراسات تفاعلية بين المضيف والممرض في الجسم الحي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات المتعلقة بنماذج الحيوانات من قبل لجنة رعاية الحيوانات المؤسسية المحلية ومجلس مراجعة الطب البيطري في JoVE.

1. نموذج الفأر لعدوى الحروق الناتجة عن Acinetobacter baumannii المضيء بيولوجيا

1. استخدم فئران BALB/c بالغة بعمر 7-8 أسابيع ووزنها بين 17-19 جرام. دع الفئران تتكيف مع ظروف المختبر لمدة لا تقل عن 3 أيام قبل بدء التجربة. حافظ على الفئران في دورة ضوء/ظلام لمدة 12 ساعة تحت درجة حرارة غرفة 21 درجة مئوية وقدم لها الطعام والماء بحرية تامة.
2. قم بتخدير الفئران بحقن داخل الصفاق من مزيج كيتامين-زيلازين (100 ملغ/كجم-20 ملغ/كغ). المس برفق بلح الفأر بمسحة قطنية؛ غياب الانعكاس الجافة يشير إلى عمق مخدر مناسب. غط عيني الفأر بمرهم بيطري لمنع جفافها أثناء التخدير.
3. احلق الفئران من الخلف لتكشف أكبر قدر ممكن من الجلد باستخدام مقص شعر ب 50 شفرة.
4. ضع غطاء طبق بتري بقياس 35 مم تحت بطن كل فأر للحفاظ على ظهره أفقيا نسبيا.
5. اغلي الماء في كأس بسعة 250 مل (ممتلئ بنسبة 80٪) باستخدام لوحة تسخين تيار متردد بحجم 10" × 10"، 220 فولت (VAC). اغمر كتلة نحاسية (1 سم × 1 سم مقطع عرضي) في الكأس حتى يتم الوصول إلى التوازن الحراري مع الماء. عادة ما يستغرق التوازن الحراري <5 دقائق ويتم الإشارة إليه بإعادة غليان الماء في الكأس.
6. قبل التسبب في إصابة الحروق، أعط مسكنات استباقية (حقنة تحت الجلد بجرعة 0.1 ملغ/كغ بوبرينورفين) لتخفيف الألم.
7. بعد عشر دقائق من المسكنات المسبقة، اضغط بلطف على الكتلة النحاسية المسخنة على المنطقة المحلوقة في ظهر الفئران لمدة 7 ثوان لإحداث جروح حروق.
   ملاحظة: لتجنب الإصابة الحرارية للعاملين، ارتد قفازات مقاومة للحرارة عند إجراء عملية الحرق.
8. أعط 0.5 مل من محلول ملحي معقم عن طريق الحقن تحت الجلد لمنع الجفاف.
9. بعد خمس دقائق من تحفيز الإصابة الحرارية، قم بتلقيح 50 ميكرولتر من التعليق البكتيري الذي يحتوي على 5 × وحدات تشكيل مستعمرات (CFU) في محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) على حروق الفأر باستخدام ماصة. ثم، باستخدام مسحة قطنية معقمة بحركة متعرجة على الجلد، قم بمسح الأليكوات على الحروق لتوزيع الخلايا البكتيرية في المنطقة المحترقة بأكبر قدر ممكن من التساوية.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
فأر	مختبرات تشارلز ريفر، ويلمنغتون، ماساتشوستس	BALB/c	عمر 7-8 أسابيع، وزن 17-19 جرام
Acinetobacter baumannii	مركز بروك الطبي العسكري، فورت سام هيوستن، تكساس	العزل السريري	انفعال مضيء هندسي
حقن الأنسولين	فيشر ساينتيفك	14-826-79	حقن الإنسولين U-100 منخفضة الجرعة لحقن BD
كلوريد الصوديوم	فيشر ساينتيفك	721016	كلوريد الصوديوم بنسبة 0.9٪
محلول ملحي مخزن بالفوسفات، محلول 1x	فيشر ساينتيفك	BP24384	مخزن فوسفات قياسي يستخدم في العديد من الإجراءات الجزيئية الحيوية
حلقات التطعيم	فيشر ساينتيفك	22-363-605	لدهن الميكروفون البكتيري على سطح الاحتراق للفئران
كتلة النحاسية	سمول بارتس، ميامي، فلوريدا	10 مم × 10 مم	لإنشاء الحروق في الفئران
قفازات التنين الأقصى PBI/Kevlar عالية الحرارة	شركة سوبيريور جلوف ووركس المحدودة، تشيكتواغا، نيويورك	PBI83514	قفازات مقاومة للحرارة
أطباق غراينر	شركة سيغما-ألدريتش ذات المسؤولية المحدودة	P5112-740EA	35 مم ×10 مم
لوحة تسخين كورنينج الرقمية	شركة كول-بارمر للآلات ذات المسؤولية المحدودة	UX-84301-65	10" × 10"، 220 فولت تيار متردد، لغلي الماء
سرير جراحة مسخن بالماء بخط رفيع من نوع فأر/جرذ	أنظمة إي-زد	EZ-211	يمنع فقدان الحرارة وانخفاض حرارة الجسم أثناء الجراحة
مرهم بيطري	S&K فارما، GmbH	كيراتو بيتشيرون 5٪، أوجينسالبي	مرهم العيون لمنع جفاف العين