تصوير التلألؤ الحيوي لجروح الحروق المصابة ب Acinetobacter baumannii في الفئران

الملخص

المصدر: وانغ، ي.، وآخرون. في الحياة دراسة العلاج بالضوء الأزرق المضاد للميكروبات لعدوى الحروق المقاومة للأدوية متعددة Acinetobacter baumannii باستخدام التصوير التوهجي الحيوي. J. Vis. Exp. (2017)

يوضح هذا الفيديو إجراء تصوير التهابات جروح الحروق في الفئران الملقحة بمادة Acinetobacter baumannii التي تحمل أوبيرونا مضيء حيويا. يوضح كيف ينتج أكسدة الركيزة المحفزة باللوسيفيراز ضوءا يتناسب مع الحمل البكتيري، مما يمكن من مراقبة تقدم العدوى في الوقت الحقيقي باستخدام نظام تصوير التلألؤ الحيوي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات المتعلقة بنماذج الحيوانات من قبل لجنة رعاية الحيوانات المؤسسية المحلية ومجلس مراجعة الطب البيطري في JoVE.

1. تصوير العدوى بالتوهج الحيوي في الفئران

1. صور الفئران باستخدام نظام تصوير في الإضاءة المنخفضة يشمل كاميرا جهاز مكثف مرتبط بالشحنة، وحدة تحكم كاميرا، غرفة عينات، ومعالج صور.
2. قم بتخدير الفئران بحقنة داخل الصفاق من مزيج كيتامين-زيلازين (100 ملغ/كغ - 20 ملغ/كغ). المس برفق الباللب للفئران بمسحة قطنية؛ غياب الانعكاس الجافة يشير إلى عمق مخدر مناسب.
3. ابدأ برنامج التصوير الحي. في لوحة التحكم التي تظهر، اضغط على التهيئة. انتظر حتى يتحول لون صندوق درجة الحرارة إلى الأخضر، مما يشير إلى أن درجة حرارة المرحلة في غرفة العينة وصلت إلى 37 درجة مئوية.
4. ضع الفئران على المسرح (37 درجة مئوية) في غرفة العينة في نظام التصوير، مع وجود الحروق المصابة مباشرة تحت الكاميرا.
   ملاحظة: قد ينخفض التلألؤ الحيوي للبكتيريا عندما تجف الحروق. لذلك، ينصح بترطيب حروق الفأر باستخدام PBS قبل التصوير.
5. في لوحة التحكم، ضع علامة تحقق بجانب "تومع". اختر "التعريض التلقائي" بحيث يتم تحسين وقت التعريض للتصوير بواسطة برنامج التصوير الحي بناء على شدة التلألؤ الحيوي.
6. اختر "C" من قائمة "مجال الرؤية" المنسدلة. اختر خيار "مسح النطاق المتوسط" ليتيح للبرنامج تحديد مسافة البؤرة. ضع علامة تحقق بجانب Overlay.
7. انقر على "اقتناء" لالتقاط الصورة. في مربع "تحرير تسمية الصورة"، انقر على "موافق"؛ ستظهر "نافذة الصورة" و"لوحة الرسوم".
8. حدد معلمات العائد التلقائي للاختيار التلقائي.
9. قم بقياس شدة التوهج الحيوي كوحدات توهج نسبية (RLUs) وعرض التوهج الحيوي بمقياس ألوان زائفة يتراوح من الوردي (الأكثر شدة) إلى الأزرق (الأقل شدة).
10. احسب نسبة البقاء للبكتيريا في حروق الفئران في نقاط زمنية مختلفة بناء على تحليل شدة التوهج الحيوي. نسبة بقاء البكتيريا في نقطة زمنية معينة = شدة التلألؤ الحيوي المقاسة في تلك النقطة الزمنية / شدة التوهج الحيوي المقاسة قبل التعرض للضوء الأزرق المضاد للميكروبات مباشرة.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
IVIS	شركة بيركين إلمر إنك، والثام، ماساتشوستس	آيفيس لومينا سيريز III	التصوير ما قبل السريري في الجسم الحي
LED دايود باعث الضوء	شركة VieLight، تورونتو، كندا	415 نانومتر	مصدر الضوء للإضاءة
فأر	مختبرات تشارلز ريفر، ويلمنغتون، ماساتشوستس	BALB/c	عمر 7-8 أسابيع، وزن 17-19 جرام
Acinetobacter baumannii	مركز بروك الطبي العسكري، فورت سام هيوستن، تكساس	العزل السريري	انفعال مضيء هندسي
أطباق غراينر	شركة سيغما-ألدريتش ذات المسؤولية المحدودة	P5112-740EA	35 مم ×10 مم