العلاج بالضوء الأزرق للعدوى البكتيرية المقاومة للأدوية في جروح الحروق في نموذج الفأر

الملخص

المصدر: وانغ، ي.، وآخرون. التحقيق الحي: العلاج بالضوء الأزرق المضاد للميكروبات لعلاج التهابات الحروق المقاومة للأدوية متعددة Acinetobacter baumannii باستخدام التصوير الحيوي التلألئ. J. Vis. Exp. (2017)

يوضح هذا الفيديو الإجراء لعلاج التهابات جروح الحروق الناتجة عن البكتيريا المقاومة للأدوية المتوهجة حيويا في الفئران باستخدام العلاج بالضوء الأزرق، يليه تصوير التوهج الحيوي لمراقبة فعالية العلاج.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات المتعلقة بنماذج الحيوانات من قبل لجنة رعاية الحيوانات المؤسسية المحلية ومجلس مراجعة الطب البيطري في JoVE.

1. العلاج بالضوء الأزرق المضاد للميكروبات لعدوى A. baumannii في الفئران

1. قم بتخدير الفئران بحقنة داخل الصفاق من مزيج كيتامين-زيلازين (100 ملغ/كغ - 20 ملغ/كغ). غياب رد الفعل الجنسي يشير إلى عمق مخدر مناسب.
2. قسم الفئران عشوائيا إلى مجموعة معالجة ب aBL (n = 10) ومجموعة ضابطة غير معالجة (n = 10).
3. بالنسبة للمجموعة المعالجة بالضوء الأزرق المضاد للميكروبات (aBL)، غط عيون الفئران بورق الألمنيوم لتجنب التعرض المفرط للضوء. ضع حروق الفأر مباشرة تحت الصمام الثنائي الصادر للضوء (LED)، مع غطاء صحن بتري بقطر 35 مم تحت بطن الفأر للحفاظ على ظهورهم أفقيا.
4. استبدل مقياس الطاقة/الطاقة المذكور في الخطوة 3.5 بفأرة على طبق بتري مربع. اضبط ارتفاع الفأرة إلى موضع تكون فيه المسافة بين فتحة LED وسطح حرق الفأرة مساوية للمسافة بين فتحة LED ومستوى حساس الضوء في مقياس الطاقة/الطاقة.
5. تعريض الحروق المصابة بإشعاع 100 ميلي واط/سم^مربع. توصيل aBL بجرعات 72 جول/سم^مربع حتى تصل جرعة إجمالية 360 جول/سم^مربع (مثلا: 0، 72، 144، 216، 288، و360 جول/سم^مربع). بعد كل جرعة ضوئية، قم بإجراء تصوير التلميع الحيوي للفئران.
6. بالنسبة لمجموعة الضابط غير المعالجة، قم بإجراء تصوير تلوهج حيوي لحروق الفئران، باستخدام نفس الفترات الزمنية المستخدمة في المجموعة المعالجة ب aBL.
7. قبل تعافي الفئران، ضع الفئران على سرير الجراحة المسخن بالماء لمنع فقدان الحرارة وانخفاض حرارة الجسم. راقب نشاط الفئران ورعكاس الجرفس حتى التعافي. بعد تعافي الفئران، وضعها في كل قفص 2-3 فقط.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
IVIS	شركة بيركين إلمر إنك، والثام، ماساتشوستس	آيفيس لومينا سيريز III	التصوير ما قبل السريري في الجسم الحي
LED دايود باعث الضوء	شركة VieLight، تورونتو، كندا	415 نانومتر	مصدر الضوء للإضاءة
عداد الطاقة/الطاقة	ثورلابز، نيوتن، نيوجيرسي	PM100D	كاشف إشعاع الضوء
فأر	مختبرات تشارلز ريفر، ويلمنغتون، ماساتشوستس	BALB/c	عمر 7-8 أسابيع، وزن 17-19 جرام
Acinetobacter baumannii	مركز بروك الطبي العسكري، فورت سام هيوستن، تكساس	العزل السريري	انفعال مضيء هندسي
محلول ملحي مخزن بالفوسفات، محلول 1x	فيشر ساينتيفك	BP24384	مخزن فوسفات قياسي يستخدم في العديد من الإجراءات الجزيئية الحيوية
رؤوس مناصب فيشر ساينتيفيك ريدي-تيب، 1-200 ميكرولتر	فيشر ساينتيفك	02-707-502	نصائح المنابر
كتلة النحاس	سمول بارتس، ميامي، فلوريدا	10 مم × 10 مم	لإنشاء الحروق في الفئران
قفازات التنين الأقصى PBI/كيفلار عالية الحرارة	شركة سوبيريور جلوف ووركس المحدودة، تشيكتواغا، نيويورك	PBI83514	قفازات مقاومة للحرارة
أطباق غراينر	شركة سيغما-ألدريتش ذات المسؤولية المحدودة	P5112-740EA	35 مم ×10 مم
لوحة كورنينج الرقمية الساخنة	شركة كول-بارمر للآلات ذات المسؤولية المحدودة	UX-84301-65	10" × 10"، 220 فولت تيار متردد، لغلي الماء
سرير جراحي مسخن بالماء من نوع الفأر/جرذ	أنظمة إي-زد	EZ-211	يمنع فقدان الحرارة وانخفاض حرارة الجسم أثناء الجراحة
مرهم بيطري	S&K فارما، GmbH	كيراتو بيتشيرون 5٪، أوجينسالبي	مرهم العيون لمنع جفاف العين